人牙髓細(xì)胞誘導(dǎo)成牙本質(zhì)分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文人牙髓細(xì)胞誘導(dǎo)成牙本質(zhì)分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名：韋曦申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：凌均棨20070420人牙髓細(xì)胞誘導(dǎo)成牙本質(zhì)分化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究中山大學(xué)博士學(xué)位論文干細(xì)胞特性并能大量擴(kuò)增的細(xì)胞模型。在此基礎(chǔ)上，對DPCs進(jìn)行礦化誘導(dǎo)，采用雙向膠內(nèi)差異凝膠電泳(twodimensionaldifferentialgelelectrophoresis，2DDIGE)結(jié)合基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(

2、matrixassisstedlaseradsorptionionization—timeofflightmassspectormetryMALDI—TOFMS)鑒定，對成牙本質(zhì)細(xì)胞分化早期的差異蛋白質(zhì)組進(jìn)行研究。第一章人牙髓細(xì)胞的體外培養(yǎng)和鑒定目的：從人牙髓組織中分離培養(yǎng)DPCs，檢測STRO1的表達(dá)及其多向分化潛能，以探索具有干細(xì)胞特性并能大量擴(kuò)增的細(xì)胞模型的建立方法。方法：采用酶消化法從成人健康阻生第三磨牙或因正畸拔除的雙尖牙牙髓

3、組織中分離培養(yǎng)DPCs，免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測第3代DPCs中STRO1的表達(dá)。細(xì)胞分別培養(yǎng)于成牙本質(zhì)／成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基、成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基和成軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，VonKossa染色和抗DSP免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測DPCs的成牙本質(zhì)分化，油紅O染色和實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR檢測DPCs的成脂分化，阿新藍(lán)染色和抗II型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測DPCs的成軟骨分化。結(jié)果：原代細(xì)胞接種后呈集落樣生長，擴(kuò)大培養(yǎng)后的DPCs仍可見多個(gè)細(xì)胞集落。免疫細(xì)胞化學(xué)染

4、色顯示第3代DPCs表達(dá)STRO1。細(xì)胞經(jīng)礦化誘導(dǎo)21d，VonKossa染色示褐色礦化結(jié)節(jié)；誘導(dǎo)前細(xì)胞抗DSP染色陰性，誘導(dǎo)iOd后抗DSP染色陽性。對照細(xì)胞未見油紅O陽性著色，成脂誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)可見紅色的脂滴，脂肪特異性LPL和PPARy2mRNA水平顯著上調(diào)(p0001)。細(xì)胞經(jīng)軟骨誘導(dǎo)21d，阿新藍(lán)染色見大量藍(lán)染區(qū)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色示誘導(dǎo)細(xì)胞抗II型膠原陽性。結(jié)論：采用酶消化法分離培養(yǎng)的DPCs，表達(dá)STROI，可向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞