PPARγ和腦缺血損傷的關系及保護機制研究.pdf

1、過氧化小體增殖劑激活型受體γ(PPARγ)屬于核受體超家族成員，是一種配體激活型轉錄因子，其可將體內穩(wěn)態(tài)變化和病理刺激等轉變?yōu)榧毎麅刃盘柾ㄟ^與特異的DNA反應元件作用后控制基因的表達。細胞培養(yǎng)實驗顯示給予PPARγ激活劑后炎性細胞活性受抑制；腎臟和心肌等缺血再灌注損傷時存在PPARγ表達下調，同時通過腎臟、心肌、肺等組織臟器的缺血再灌注動物模型實驗研究顯示，給予外源性的PPARγ激活劑后可下調炎性反應從而減輕缺血性損傷，以上提示PPAR

2、γ可能和缺血性病變時的炎性損傷存在一定的關系。臨床實驗研究顯示，腦梗死患者急性期周圍血淋巴細胞存在PPARγ表達下調，同時PPARγ表達低的患者，血清IL-6水平(在一定程度上可以反映炎性程度的強弱)高，并且梗死體積大，這種相關性提示PPARγ表達下調后可能使炎性反應的調控作用減弱，進而導致腦缺血性炎性損傷。但周圍血淋巴細胞中PPAR7表達下調是否可以顯示腦組織缺血性病變時也存在PPARγ表達的下調，尚不能肯定。另外，小腦顆粒細胞培養(yǎng)實

3、驗還顯示，PPARγ激活劑還可以通過降低iNOS的表達和活性而減少細胞凋亡，因此推測腦血后iNOS的表達的增加可能也和PPARγ表達下調有關(PPRγ表達下調后，對iNOS表達的抑制調控作用降低，進而導致了NO生成的增加)，并進一步導致了細胞凋亡。以上提示PPARγ可能和腦缺血損傷存在一定的關系，將其作為一干預靶點進行研究對于探索如何保護缺血腦組織可能具有重要的意義。如果上述推測(加下劃線部分)存在合理性，那么給予外源性激活劑應該能減輕

4、腦缺血損傷，同時出現(xiàn)炎性反應和iNOS的表達及活性的下調，NO的生成也應該下降。本實驗將對上述問題進行分析和討論。 第一部分大鼠缺血再灌注腦組織PPAR7表達變化 研究目的：探討實驗性缺血再灌注大鼠腦組織PPAR7 mRNA和蛋白的表達變化，結合文獻分析其和腦缺血損傷的關系。 研究方法：建立SD大鼠MCAO缺血90min再灌注模型。實驗分為對照組、假手術組和缺血再灌注組。缺血再灌注組取缺血后12h、24h和48h

5、三個時間點進行觀察。用RT-PCR方法及Western blotting方法分別檢測PPARγ mRNA和蛋白的表達。 研究結果：腦缺血再灌注組PPAR7 mRNA和蛋白表達較正常對照組和假手術組明顯降低。通過對缺血后12h、24h和48h三個時間點的動態(tài)變化觀察顯示，缺血后12h表達最低，并且隨缺血后時間的推移，其表達逐漸增加，存在顯著性差異。但缺血后48h的表達值仍低于正常對照組和假手術組。 結論：缺血再灌注腦組織P

6、PARγ表達下調可能通過炎性機制和凋亡參與了腦缺血病理損傷，提示針對PPARγ作為一靶點進行干預可能對于缺血性腦血管病的治療是一個新的研究方向。 第二部分PPAR7激活劑對大鼠缺血再灌注腦組織損傷的影 響及對PPARv表達的影響 研究目的：明確不同劑量的PPAR7激活劑對缺血再灌注腦組織損傷的影響及對PPAR7表達變化的影響。 研究方法：健康雄性SD大鼠分為假手術組、生理鹽水干預組、小劑量吡格列酮(PPAR

7、),激活劑)干預組、大劑量吡格列酮干預組。MCAO前3天分別給予吡咯列酮，每日一次灌胃給藥。劑量分別是：小劑量組為10mg／Kg.d，大劑量組為15mg／kg．d；生理鹽水干預組僅給予等量生理鹽水；假手術組亦給予等量生理鹽水。以缺血后24h作為觀察時間點，對各指標進行比較分析。TUNEL法檢測細胞凋亡，TTC染色測定腦梗死體積，生物化學方法檢測腦組織EB含量(反應血腦屏障通透性變化)，RT-PCR和Western blotting方法分

8、別檢測PPARγmRNA和蛋白的表達，血壓測定儀測定大鼠血壓變化，全自動生化分析儀測定血糖、膽固醇、甘油三酯變化，放射免疫法測定血清胰島素水平(排除吡格列酮通過對代謝和血壓的調節(jié)而干擾了對腦缺血后所要觀察指標的影響)。 研究結果： 1．PPARγ激活劑可以明顯降低腦梗死體積，改善血腦屏障通透性和減少細胞凋亡。并且大劑量干預組較小劑量干預組效果顯著。 2．兩種不同劑量的PPARγ激活劑對動物的血糖、血脂、胰島素水平

9、及血壓變化無影響。 3．PPARγ激活劑可以促進PPARγ mRNA和蛋白表達的增加，并且呈現(xiàn)出隨吡格列酮劑量的增加而增高的趨勢。 研究結論：PPARγ激活劑可以促進缺血再灌注腦組織PPARγmRNA和蛋白的表達，并且當干預劑量增加的同時，伴隨著PPARγ表達的進一步增加，其所呈現(xiàn)出的對缺血腦組織的保護作用也進一步增強，以上提示將PPARγ作為一靶點，利用其激活劑對其進行干預可以對缺血再灌注腦組織產生保護作用。

10、第三部分PPARy激活劑對大鼠缺血再灌注腦組織損傷保護作用機制的探討 研究目的：探討PPARγ激活劑對缺血再灌注腦組織保護作用的炎性機制和細胞凋亡機制。 研究方法：動物分組、給藥方法及選擇觀察時間點同上。生物化學方法測定MPO(反應中性粒細胞聚集)和iNOS的活性及NO的生成，RT-PCR方法測定ICAM-1、IL-1β、MMP-9、iNOS的mRNA表達水平。 研究結果：吡格列酮可以顯著下調缺血再灌注腦組織MP

11、O和iNOS活性并減少NO的生成，同時下調ICAM-1、IL-lβ、MMP-9、iNOS的mRNA表達水平。上述指標均呈現(xiàn)出隨吡格列酮劑量的增加而下調幅度增強的趨勢，除MMP-9外其余指標均顯示大劑量給藥組較小劑量給藥組下調明顯。 研究結論：PPARγ激活劑應用后，可以減少缺血再灌注腦組織中性粒細胞的浸潤，同時下調IL-1β、ICAM-1、MMP-9、iNOS的mRNA表達及iNOS活性，并減少NO的生成，以上提示調控炎性損傷路