肝細(xì)胞生長因子基因轉(zhuǎn)染兔髁狀突軟骨細(xì)胞及轉(zhuǎn)染細(xì)胞對TMD的治療研究.pdf

1、目的 觀察攜帶有GFP標(biāo)記的HGFcDNA的質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染兔髁突軟骨細(xì)胞后的主要生物學(xué)特性,及其對TMD動物模型的治療效果。方法 無菌條件下取兔髁狀突軟骨細(xì)胞體外進行原代的培養(yǎng)與增殖,軟骨細(xì)胞傳至第Ⅱ代時以脂質(zhì)體為載體將GFP標(biāo)記的HGFcDNA轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞,然后在倒置顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)變化、細(xì)胞增殖情況,瞬間細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率,噻唑藍(MTT)法檢測軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的增生能力,免疫組化及原位雜交法測其Ⅱ型膠原在轉(zhuǎn)染前后的變化與mRN

2、A的表達水平,HE細(xì)胞染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化。通過綠色熒光光鏡下轉(zhuǎn)染細(xì)胞的瞬時計數(shù),在視野內(nèi)取100個細(xì)胞進行計數(shù),共取10次,取其均值,得出轉(zhuǎn)染率結(jié)果。以膠原酶進行顳下頜關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射,建立TMD動物模型,將收集的轉(zhuǎn)染后的軟細(xì)胞進行關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射,并與對照組(空白質(zhì)粒組)比較,通過組織切片觀察治療效果。結(jié)果 軟骨細(xì)胞的原代細(xì)胞在15%NBS的DMEM中24h后軟骨細(xì)胞開始舒展,第三天時基本完全貼壁,10d左右長滿培養(yǎng)瓶底；原代軟骨細(xì)胞為

3、多邊形和三角形,細(xì)胞輪廓清晰,核仁明顯。第二代以脂質(zhì)體為載體的GFP標(biāo)記的HGFcDNA轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24h后在熒光顯微鏡下可清楚的看到GFP標(biāo)記的HGF進入軟骨細(xì)胞內(nèi)；軟骨細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后2代左右變的細(xì)胞狹長并逐漸變回原來的多變形、三角形,并可加速生長和促進其增殖,Ⅱ型膠原在第Ⅵ代時仍有較強表達,軟骨細(xì)胞的“退化”現(xiàn)象明顯推遲,而對照組軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原則明顯減弱,細(xì)胞形態(tài)有較大的變異。通過綠色熒光光鏡下轉(zhuǎn)染細(xì)胞的瞬時計數(shù),基因轉(zhuǎn)染率大