太子參ISSR分子標(biāo)記.pdf

1、目的:摸索適合于太子參ISSR的基因組DNA提取方法，篩選太子參ISSR引物，建立ISSR-PCR反應(yīng)體系，檢測太子參的ISSR分子標(biāo)記，分析不同產(chǎn)地太子參的遺傳關(guān)系，為太子參的遺傳育種、品種改良奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法:采用改良的CTAB法和非常規(guī)的尿素法兩種方法對比提取太子參基因組DNA，運用單因素影響試驗建立ISSR-PCR反應(yīng)體系，通過NTSYS-pc version-2.11f計算機軟件構(gòu)建聚類樹狀圖，對12個產(chǎn)地的太子

2、參遺傳關(guān)系進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:1.獲得了適宜ISSR-PCR擴增的太子參基因組DNA提取的最佳方案。提取出的太子參基因組DNA其OD260/OD280在1.78～1.9范圍內(nèi)。找出一種全新的快速提取植物基因組DNA的方法——尿素法。
　　2.優(yōu)化出了適于太子參的ISSR-PCR的最佳反應(yīng)體系，即在20μl反應(yīng)體系中，Mg2+濃度為37.5mmol/L，dNTPs濃度為0.25mmol/L，DNA模板濃度為30 ng，引物濃

3、度為0.4μmol/L，Taq DNA聚合酶的用量為2.5 U，10× Buffer為2.5μl。反應(yīng)程序:94℃預(yù)變性5 min，94℃變性1 min，37.9～70.1℃退火1min，72℃延伸2 min;35個循環(huán);72℃繼續(xù)延伸5min，4℃保溫。獲得了清晰、穩(wěn)定的指紋圖譜。
　　3.從18條ISSR引物中篩選出5條引物用于指紋圖譜的構(gòu)建。在ISSR-PCR試驗中，共得到48條帶，其中42條表現(xiàn)出多態(tài)性，占總帶數(shù)的87.5

4、％，太子參的多態(tài)位點百分率(PPB)在75％和100％之間。每條引物產(chǎn)生的位點數(shù)在8～12個之間。平均每個引物擴增的DNA帶數(shù)為9.6條，大小介于200～1200bp之間。太子參各居群樣品的相似系數(shù)在0.231～0.923之間。
　　4.根據(jù)UPGMA方法構(gòu)建聚類樹狀圖:12個產(chǎn)地的太子參分別聚為兩大類:采自安徽省境內(nèi)的宣州、亳州太子參和其他10個產(chǎn)地的太子參分別聚為兩個大類。在10個產(chǎn)地的第二大類中，最先是來自同一個省份貴州的花

5、溪、丹寨、施秉、黃平太子參聚到了一起，然后與來自江蘇省的句容、江寧太子參相聚，再與附近的丹陽、潥陽太子參會合，最后與福建省柘榮太子參相聚，來自山東省臨沭縣的太子參居群在這第二大類聚類關(guān)系圖的最外層。太子參12個居群的遺傳距離在0.044～0.973之間，其中花溪和丹寨、花溪和黃平、花溪和江寧、施秉和丹寨的遺傳距離最近為0.044，說明它們之間親緣關(guān)系很近。句容和宣州遺傳距離最遠(yuǎn)為0.973，說明它們之間的遺傳變異程度大。
　　結(jié)論