非血緣HLA不全相合雙份臍血移植植入動力學的基礎研究.pdf

1、背景與目的:臍血造血干細胞是良好的造血干細胞（haematopoietic stem cell，HSC）來源，但臍血中含有的HSC數(shù)量相對不足從而限制了其在成人中的應用。使用雙份臍血混合移植治療白血病獲得成功，激起人們對其相互作用機制的研究。研究證實，接受雙份臍血移植的患者，大部分患者長期造血重建的僅來源于一份臍血，而另一份臍血在植入早期即被排斥，但是雙份臍血移植的植入動力學的機制目前尚無定論，推測雙份臍血中的淋巴細胞與優(yōu)勢份臍血的產生

2、相關。探討雙份非血緣臍血移植用于惡性血液病植入動力學的規(guī)律和臨床療效。實驗方面將雙份臍血的CD34+細胞與CD3+細胞混合培養(yǎng)，觀察CD3+細胞對CD34+細胞的增殖分化有無影響。
　　 方法:臨床上選擇21例惡性血液系統(tǒng)惡性疾病行非親緣雙份臍血移植的患者為觀測對象，使用復合擴增熒光標記短串聯(lián)重復序列（STR-PCR）結合毛細管電泳技術，動態(tài)檢測DUCBT受者移植后臍血植入情況，統(tǒng)計與植入可能相關的各項數(shù)據(jù)。實驗中建立液體和半固

3、體培養(yǎng)體系，將免疫磁珠分選純化的雙份臍血的CD34+細胞和CD3+細胞混合培養(yǎng)6天和14天。以流式細胞計數(shù)觀測CD34+細胞培養(yǎng)后的分化指標（CD33，CD41，CD71）；計數(shù)集落形成單位（GM-CFU、BFU—E、GEMM-CFU）分析CD34+細胞的增殖情況。
　　 結果:1.臍血移植植入情況 18/21例DUCBT獲得造血重建，中性粒細胞絕對計數(shù)（ANC）＞0.5×109/L的中位時間為移植后20（14～35）天，血小板

4、＞20×109/L的中位時間為移植后34.5（25～49）天。經STR-PCR技術檢測顯示17/18例受者形成單份臍血的優(yōu)勢植入。非優(yōu)勢份臍血輸注的有核細胞總數(shù)（total nucleated cell，TNC）,CD34+細胞數(shù)和CD3+細胞數(shù)為2.17×107 NC/Kg (0.96-3.98×107 NC/kg)，1.16×105CD34+/Kg (0.36–2.70×105CD34+/Kg)與1.71×106CD3+/Kg (0

5、.40-10.65×106 CD3+/kg)，優(yōu)勢份臍血此兩項分別為2.34×107 NC/Kg (1.87-4.45×107NC/kg),1.15×105CD34+/Kg(0.08–4.00×105CD34+/Kg)和3.225×106 CD3+/Kg(0.51-13.92×106CD3+/kg，差異不具有顯著性(P=0.718,0.936,0.073)。 2.液體共培養(yǎng)后各份CD34+細胞表面分化指標的變化臍血CD34+細胞分選富集

6、的純度為（98.5±0.92）％。3天實驗組和對照組的各項分化指標無差異（P>0.05）；6天的CD33、CD71實驗組明顯低于對照組，而CD41明顯高于對照組（P＜0.05）。3.半固體共培養(yǎng)后CD34+細胞增殖能力的變化實驗組的紅系集落形成單位(BFU—E)及粒單細胞集落形成單位(GM-CFU)數(shù)低于對照組（P＜0.05），混合細胞集落形成數(shù)(GEMM-CFU)與對照組無差別（P>0.05）。
　　 結論: 1.雙份臍血移植