豬鏈球菌2型斑馬魚(yú)模型的應(yīng)用和劍尾魚(yú)MHC-DXB基因Exon2片段的原核表達(dá).pdf

1、選用1005尾AB系斑馬魚(yú)(Danio rerio)以檢測(cè)豬鏈球菌2型(Streptococcus suis type2，SS2)不同分離株的致病力。檢測(cè)對(duì)象為8株基因型均為mrp+eF+、對(duì)豬有致病力的SS2菌株。結(jié)果斑馬魚(yú)接種細(xì)菌12h后呈敗血癥病變，96h內(nèi)的半數(shù)致死量(LD<,50>)在6.92×10<'3>至5.01×10<'4>之間。上述斑馬魚(yú)均可從體內(nèi)重新分離到接種菌。同時(shí)檢測(cè)一株基因型為mrp-eF-、對(duì)豬無(wú)致病力的SS

2、2菌株，斑馬魚(yú)接種后96h內(nèi)不表現(xiàn)任何病變，亦不出現(xiàn)死亡，對(duì)斑馬魚(yú)的LD<,50>>10<'6>cfu。SS2有毒力株和無(wú)毒力株對(duì)斑馬魚(yú)的LD<'50>差異極顯著。以斑馬魚(yú)評(píng)價(jià)SS2分離株的主動(dòng)免疫及被動(dòng)免疫效果。AB系斑馬魚(yú)50尾/組，27℃恒溫飼養(yǎng)。以滅活江蘇分離株HA9801、滅活四川分離株ZY05719、溶菌酶釋放蛋白(MRP)重組蛋白、pET空載體融合蛋白、豬抗HA9801高免血清、豬陰性血清及生理鹽水腹腔注射各1組斑馬魚(yú)。1

3、4d后進(jìn)行二免。29d后以50LD<,50>。劑量，腹腔內(nèi)接種HA9801。另取滅活HA9801、滅活ZY057l9同法免疫斑馬魚(yú)各1組，接種50LD<,50>劑量ZY05719。接種后均觀察7d，計(jì)算每組相對(duì)保護(hù)率(RSP)。結(jié)果對(duì)照組全數(shù)死亡，接種HA9801后注射HA9801全菌苗、ZY05719全菌苗、MRP重組蛋白、豬高免血清、豬陰性血清組的RSP(％)分別為78、72、61、72、8；接種ZY05719后，HA9801全菌苗

4、、ZY05719全菌苗免疫組的RSP均為86％。顯示兩種全菌滅活苗對(duì)HA9801、ZY05719的攻擊均有較好的保護(hù)效果，MRP重組蛋白及SS2高免血清對(duì)斑馬魚(yú)有一定保護(hù)作用。斑馬魚(yú)可用于SS2疫苗的篩選和抗SS2血清效價(jià)的檢測(cè)。斑馬魚(yú)適宜作為研究豬鏈球菌2型菌株感染的動(dòng)物模型。 為研究魚(yú)類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)II類分子功能，本研究亞克隆了劍尾魚(yú)RR-B品系MHC-DXB基因的exon2基因，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-exon2