白樺酯酸通過阻斷TLR4-NF-κB信號(hào)通路抑制肝纖維化及酒精性脂肪肝的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝纖維化是發(fā)生在所有慢性肝病患者上的一種可逆的創(chuàng)傷性反應(yīng)。肝纖維化是發(fā)展到肝硬化的必經(jīng)階段，并與肝癌有關(guān)，是所有慢性肝病晚期并發(fā)癥的共同病理基礎(chǔ)。在肝損傷的過程中，活化的肝星狀細(xì)胞(HSC)是肝纖維化形成過程中產(chǎn)生膠原的主要細(xì)胞，關(guān)于HSC細(xì)胞增殖及ECM產(chǎn)生中的分子機(jī)制研究是近來關(guān)注的熱點(diǎn)。抑制炎癥反應(yīng)，對(duì)抗氧化應(yīng)激，調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞因子的活性，干擾細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等途徑能夠有效地抑制HSC的增殖、活化，從而有效對(duì)抗肝纖維化。肝細(xì)胞是各種

2、肝毒性介質(zhì)作用的主要靶細(xì)胞，包括各種肝炎病毒，酒精的代謝物和膽汁酸等，破壞肝細(xì)胞并釋放大量活性氧簇(ROS)和炎性介質(zhì)，造成炎癥細(xì)胞的活化并進(jìn)一步激活HSC，加劇肝纖維化的發(fā)生。因此，發(fā)現(xiàn)肝保護(hù)藥物是發(fā)展抗肝纖維化治療的迫切需要。
　　本實(shí)驗(yàn)采用硫代乙酰胺和酒精建立肝纖維化模型，通過體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)研究白樺酯酸的抗肝纖維化作用及潛在的作用機(jī)制。
　　(1)使用硫代乙酰胺(200mg/kg)建立大鼠肝纖維化模型，腹腔注射硫代乙酰

3、胺每周兩次連續(xù)六周。白樺酯酸(20mg/kg or50mg/kg)與硫代乙酰胺同時(shí)給藥或在其之后給藥直至第六周或第八周,考察白樺酯酸的肝臟預(yù)防作用和保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示白樺酯酸能夠有效對(duì)抗和治療肝纖維化，并減少了由硫代乙酰胺刺激后造成的肝組織中羥脯氨酸和α-SMA的增多。體外實(shí)驗(yàn)表明，白樺酯酸能夠有效減少由TNF-α激活的HSC的活性，同時(shí)在正常人張氏肝細(xì)胞中沒有毒性作用。此外，白樺酯酸也能夠明顯降低α-SMA和TIMP-1的水平，增

4、加MMP-13的表達(dá)，抑制了TLR4、MyD88的水平并激發(fā)了NF-κB的核轉(zhuǎn)導(dǎo)活性，伴有時(shí)間依賴性。
　　(2)使用乙醇建立酒精肝模型。小鼠灌胃給藥乙醇(5g/kg)3次間隔12h。同時(shí)給予白樺酯醇或白樺酯酸(50mg/kg或20mg/kg)。體外實(shí)驗(yàn)，使用乙醇(50mM)激活HSC，并處理25μM和12.5μM的白樺酯醇和白樺酯酸，觀察24小時(shí)。病理組織學(xué)結(jié)果顯示在體內(nèi)白樺酯醇和白樺酯酸能夠抑制酒精誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性和壞死，同

5、時(shí)，白樺酯醇和白樺酯酸能夠有效抑制CYP2E1和SREBP-1的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，酒精濃度在20-200mM沒有影響細(xì)胞的增殖，而且能夠有效抑制 ECM的聚集減少collagen-1的水平和α-SMA的表達(dá)。同時(shí)增加了調(diào)控SREBP-1基因的主要蛋白AMPK和STAT3的表達(dá)，白樺酯醇和白樺酯酸的保護(hù)機(jī)制可能與抑制TLR4、MyD88的信號(hào)通道，抑制NF-κB的活性有關(guān)。且白樺酯酸對(duì)抗乙醇誘導(dǎo)的肝纖維化具有更強(qiáng)的保護(hù)作用。