腎上腺髓質(zhì)素基因pEGFP-N3重組載體的構(gòu)建、表達(dá)及其對(duì)大鼠系膜細(xì)胞的作用.pdf

1、基因治療是二十世紀(jì)八十年代后期出現(xiàn)的新興邊緣科學(xué)，其又可分為正義基因療法和反義基因療法：正義基因療法是在DNA或RNA水平上把某些外源目的基因?qū)胂鄳?yīng)的靶細(xì)胞，持續(xù)表達(dá)目的蛋白從而產(chǎn)生特定的生物學(xué)效應(yīng)以達(dá)到治療目的；反義基因療法是在DNA或RNA水平上阻斷某些內(nèi)源目的基因的異常合成?！　∧I上腺髓質(zhì)素(adrenomedullin，AM)是1993年Kitamura等人于腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤(phaeochromocytoma，PC)組織提

2、取物中發(fā)現(xiàn)的一種生物活性肽。此后，研究人員發(fā)現(xiàn)腎上腺髓質(zhì)素廣泛表達(dá)于體內(nèi)多種組織。AM具有舒張血管、降低血壓、改善心臟收縮功能、增加腎臟血流、利尿利鈉等多種作用，被認(rèn)為是在治療高血壓、心力衰竭、腎功能衰竭等多種心血管腎臟疾病中具有巨大潛在應(yīng)用價(jià)值的一種內(nèi)源性多肽?！　”緦?shí)驗(yàn)中，我們?cè)O(shè)計(jì)、構(gòu)建了包含AM基因編碼全序列的pEGFP-N3重組載體(pEGFP-N3-AM1-2)，以表達(dá)AM基因產(chǎn)物-EGFP融合蛋白。另外，為了進(jìn)一步提高重組

3、質(zhì)粒的療效，本實(shí)驗(yàn)組其他成員嘗試對(duì)重組載體pEGFP-N3-AM1-2進(jìn)行了改造，構(gòu)建了含有突變AM基因的pEGFP-N3重組載體(pEGFP-N3-AM1-3)。　　為了探索AM基因療法改善大鼠腎臟功能減退的作用機(jī)理。我們采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體包裹轉(zhuǎn)染法，以pEGFP-N3-AM1-2或pEGFP-N3-AM1-3分別轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的RMCs，48小時(shí)后，應(yīng)用MTT法檢測(cè)其對(duì)RMCs細(xì)胞增殖的影響，應(yīng)用半定量RT-PCR方法檢測(cè)其對(duì)RMCs