基因組芯片制備及其在篩選腫瘤相關基因中的應用研究.pdf

1、惡性腫瘤,是嚴重威脅人類健康的一種高危常見病.腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個復雜的多階段過程,不僅涉及到多種腫瘤相關基因的表達失常,而且涉及基因組的重排.尋找新的腫瘤相關基因是目前全世界生命科學研究中的一個熱點和難點.傳統(tǒng)的方法基本是分別對單個基因進行研究,然而在生理和病理狀態(tài)下,每一個基因都不是單獨起作用的.因此,要揭示腫瘤在基因水平的本質,更有必要從基因組整體來研究.20世紀90年代誕生的DNA芯片技術,使得這種必要成為可能. 該研究以K56

2、2細胞和人外周血白細胞(WBC)為材料,利用限制性顯示和分子克隆技術,分別構建了K562細胞和健康人WBC基因組DNA片段文庫.并用PCR技術分別擴增出400多個基因組DNA片段,以純化的PCR產物做探針,制備了K562細胞和健康人白細胞基因組DNA芯片.然后,分別抽提K562細胞和正常人WBC基因組DNA,用Sau3AI酶切,并將酶切產物加上人工接頭,用限制性標記技術,標記上熒光標記物Cy3,將標記好的K562細胞基因組片段和WBC基

3、因組片段分別與制備的基因組芯片雜交.芯片雜交結果經掃描分析發(fā)現(xiàn)K562細胞腫瘤特異性基因42個,正常人WBC特異性基因16個.進一步序列分析證實,在K562腫瘤細胞特異性基因中有一個為BCR(breakpointcluster gene)基因,另外還有部分轉錄調節(jié)相關基因.研究結果表明,我們自制的K562細胞基因組和正常人WBC基因組DNA芯片,可以成功地直接應用于篩選腫瘤相關基因,為基因組水平研究腫瘤發(fā)生的分子機制提供了新的技術手段,