IETM在動脈粥樣硬化及心臟病發(fā)生發(fā)展中的作用及機制探討.pdf

1、第一部分:
　　 高糖高脂飲食誘導IETM在代謝綜合征相關AS發(fā)生發(fā)展中的作用及機制探討
　　 目的:
　　 探討高糖高脂飲食誘發(fā)腸源性內毒素血癥(IETM)在代謝綜合征相關的AS發(fā)生、發(fā)展中的作用及機制。研究血漿中持續(xù)高表達的LPS觸發(fā)代謝綜合征相關的AS發(fā)生、發(fā)展的作用機制，為防治代謝綜合征相關的AS尋求新思路及新途徑。
　　 方法:
　　 1、64只SD大鼠隨機分為對照組(normalgro

2、up;NC)和模型組(modelgroup;MG)，每組各32只;每組再隨機分3月、6月、9月、12月4個時段進行觀察，每時段8只。對照組喂飼基礎飼料，模型組喂飼高糖高脂飼料。
　　 2、放免法及酶聯(lián)免疫吸附實驗測定大鼠外周血內毒素(LPS)、腫瘤壞死因子(TNFα)、C反應蛋白(CRP)、巨噬細胞趨化蛋白-1(MCP-1)及一氧化氮(NO)、內皮素-1(ET-1)、PAI-1的水平。
　　 3、酶聯(lián)免疫吸附試驗測定外周

3、血丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、游離脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(Tch)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)的水平，并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。
　　 4、摘取主動脈及肝左葉，病理組織學觀察主動脈壁粥樣斑塊的形成及肝臟組織炎癥、脂變、纖維化病變。
　　 5、免疫組化法檢測CD68陽性的單核/巨噬細胞在動脈壁的浸潤情況;檢測動脈壁iNOS和NF

4、-κB的表達;檢測Tunnel在動脈壁的表達分析細胞凋亡情況。
　　 6、蘇丹IV(SudanIV)特殊染色法觀察動脈壁及肝細胞的脂質異位沉積。
　　 結果:
　　 1、模型組各時段大鼠外周血LPS及炎癥相關因子TNF-a、CRP、MCP-1的表達水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);血管活性因子ET-1、PAI-1的表達水平明顯高于對照組，而NO的表達水平低于對照組，差異有顯著性(P＜0.05)

5、。
　　 2、模型組各時段大鼠外周血中ALT、FFA、TG、Tch、LDL的表達水平明顯高于對照組，而HDL的水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);模型組FPG、FINS的表達水平明顯高于對照組，胰島素抵抗指數(shù)HOMA-IR的數(shù)值顯著高于對照組，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 3、主動脈病理組織學:對照組各時段主動脈壁未見明顯異常病變;模型組第3月主動脈內皮增生;6月內皮增生進一步加重，內膜明顯增厚

6、，內皮下脂質呈條帶狀沉積;中膜平滑肌細胞增生及彈力纖維紊亂;內膜/中膜比值增大;9月組動脈壁內膜進一步增厚，脂質沉積進一步增多，而中膜開始出現(xiàn)萎縮，內膜/中膜比值進一步增大;粥樣斑塊形成，其內出現(xiàn)了小灶鈣化;12月組內膜／中膜比值保持高水平，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，顯示動脈壁鈣化明顯加重。
　　 4、主動脈單核/巨噬細胞的浸潤:對照組動脈壁未見明顯單核/巨噬細胞粘附及浸潤;模型組第3月主動脈內皮表面粘附個別單核/巨噬細

7、胞，6月組內皮下可見單核/巨噬細胞浸潤;9月及12月單核/巨噬細胞在內皮下浸潤進一步增多，且主要集中在粥樣斑塊中，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 5、主動脈iNOS的表達:對照組動脈壁內皮細胞及平滑肌細胞iNOS散在少許細胞弱陽性表達。模型組大鼠動脈壁內皮細胞及平滑肌細胞表達iNOS隨觀察時間的延長陽性表達細胞逐漸增多，強度逐漸增強，各時段間的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 6、主動脈NF-κB的

8、表達:對照組動脈壁內皮細胞和平滑肌細胞NF-κB的陽性表達呈均勻一致的胞漿弱陽性表達，核無陽性表達;模型組動脈壁內皮細胞和平滑肌細胞出現(xiàn)了核陽性表達，隨著觀察時間的延長，核陽性表達逐漸增多，胞漿陽性變得不均勻，陽性部位多聚集于核附近，模型組各時段核陽性表達有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 7、主動脈Tunel的表達:Tunel檢測顯示對照組動脈壁內皮細胞和平滑肌細胞僅個別細胞核陽性表達;模型組3月組即可看到動脈壁內皮細胞和平

9、滑肌細胞明顯陽性表達;6月組核陽性表達增多;9月組和12月組動脈壁內皮細胞和平滑肌細胞呈彌漫核陽性表達，差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 8、肝臟的病理組織學觀察:對照組肝細胞未出現(xiàn)明顯病變，僅在匯管區(qū)見散在個別炎癥細胞浸潤;模型組從第3個月始大鼠先后發(fā)生了脂肪肝、脂肪性肝炎，第6個月出現(xiàn)纖維化，第12個月發(fā)展為早期肝硬化。
　　 結論:
　　 1、高糖高脂飲食誘導大鼠發(fā)生了IETM，血漿中LPS持續(xù)高表達。