甘肅省曲霉菌的RAPD分析和ITS序列分析.pdf

1、從2004年3月開(kāi)始，分別在甘肅的敦煌、武威、張掖、天祝、蘭州、白銀、定西、天水、武都等地的土樣和昆蟲(chóng)上采集并分離曲霉菌，發(fā)現(xiàn)甘肅省曲霉資源很豐富，對(duì)分離到的曲霉菌進(jìn)行常規(guī)形態(tài)鑒定和分子鑒定，并探討二者之間的關(guān)系。主要結(jié)果如下： 1.在曲霉傳統(tǒng)分類(lèi)鑒定中，由于其種類(lèi)多、且種間具有較大的相似性，因此根據(jù)形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)鑒定具有較大的難度。本研究采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)分析和核糖體(rDNA)內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)序列分

2、析方法對(duì)14種曲霉進(jìn)行分類(lèi)鑒定與系統(tǒng)發(fā)育研究，以期望能為該屬真菌分子系統(tǒng)學(xué)的研究提供新的資料。 2.14個(gè)隨機(jī)引物對(duì)14種曲霉的擴(kuò)增圖譜中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)所有曲霉的共有帶。14個(gè)隨機(jī)引物擴(kuò)增得到的211個(gè)RAPD位點(diǎn)中，有164個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性位點(diǎn)頻率占77.73﹪，表明了供試菌株間存在著豐富的多態(tài)性。試驗(yàn)中所用14個(gè)引物的RAPD圖譜能夠較客觀地反映出供試菌株間親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近。 3.基于菌株間的相似性系數(shù)分析和應(yīng)用Bet

3、ween-groupslinkage法構(gòu)建的聚類(lèi)樹(shù)狀圖，顯示出不同的曲霉種間只在較低的相似性系數(shù)聚為一類(lèi)，這與形態(tài)特征分種基本吻合，反映了形態(tài)學(xué)分類(lèi)的分子遺傳本質(zhì)，同時(shí)也表明了應(yīng)用RAPD技術(shù)進(jìn)行曲霉親緣關(guān)系分析的種類(lèi)鑒定具有合理性和可行性。 4.本研究還選取了部分形態(tài)學(xué)上的近似種和疑難種進(jìn)行ITS序列分析。分別對(duì)6個(gè)菌株的ITS區(qū)(ITS1和ITS2)及5.8SrDNA進(jìn)行了序列測(cè)定，所有序列經(jīng)排列并用Mega3.0軟件進(jìn)行分