短干擾RNA抑制Hela細胞Ku80基因表達及其對放射敏感性的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、實驗目的:構建siRNA技術實驗平臺,觀察其對人宮頸癌Hela細胞DNA雙鏈損傷修復基因Ku80表達的抑制效果.初步探討Ku80基因表達受抑對Hela細胞放射敏感性和細胞周期的影響.材料和方法:1、siRNA線性DNA載體構建:選擇人宮頸癌Hela細胞系內源基因Ku80作為靶基因.先體外經(jīng)PCR構建針對Ku80基因cDNA編碼區(qū)兩個不同位點以及無關位點的線性siRNA瞬時表達載體.2、用于轉染的Hela細胞分4組:空白對照組(只加脂質體

2、)、無關對照(轉染Ku80無關的線性siRNA表達載體)、LS<,1>/LAS<,1>實驗組和LS<,2>/LAS<,2>實驗組(各自轉染針對Ku80基因cDNA不同位點的siRNA線性表達載體).載體經(jīng)脂質體導入宮頸癌Hela細胞內轉錄產(chǎn)生21bp長度的短雙鏈siRNA.免疫印跡法分析不同時間點各組Hela細胞內源性Ku80基因在蛋白水平表達的情況.3、各組細胞經(jīng)0、2、4、8、10Gy劑量射線處理.運用克隆形成實驗(clone as

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