LTA及LPS對人牙周膜細(xì)胞凋亡和炎性細(xì)胞因子的影響.pdf

1、目的：探討脂磷壁酸(LTA)和/或脂多糖(LPS)對人牙周膜細(xì)胞(hPDLC)凋亡及分泌炎性細(xì)胞因子的影響。
　　 方法：組織貼壁法體外培養(yǎng)hPDLC，以hPDLC為受試對象，LTA、LPS為施加因素。
　　 1.利用透射電鏡觀察LTA和/或LPS作用后hPDLC超微結(jié)構(gòu)的變化及凋亡小體，用MTT法檢測LTA和LPS對hPDLC的抑制作用，ELISA檢測TNF-α的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)對凋亡細(xì)胞進(jìn)行定量分析；
　　

2、2.采用Re1-time PCR技術(shù)檢測hPDLC Fas、Bax、Cytochrome C、Caspase-3 mRNA的表達(dá)，Western-blot技術(shù)檢測相應(yīng)蛋白的表達(dá)；
　　 3.抗體芯片技術(shù)檢測炎性細(xì)胞因子的改變。
　　 結(jié)果：
　　 1.凋亡相關(guān)改變：透射電鏡下，LTA和/或LPS作用hPDLC12h后，細(xì)胞質(zhì)濃縮，空泡及凋亡小體出現(xiàn)；且同一時(shí)間點(diǎn)10μg/ml LTA與1μg/ml LPS刺激hP

3、DLC分泌TNF-α的量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；流式細(xì)胞結(jié)果表明，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞早期/晚期凋亡率及死亡率明顯增加。
　　 2.Real-time PCR技術(shù)檢測LTA和/或LPS作用于hPDLC12h后，F(xiàn)as、Cytochrome C、Caspase-3 mRNA表達(dá)均明顯上調(diào)，BAX表達(dá)下降，Western-blot技術(shù)檢測相應(yīng)蛋白表達(dá)與mRNA結(jié)果一致。
　　 3.炎性細(xì)胞因子的改變：LTA和/或LPS作用于hPDLC后，上清

4、液中多種細(xì)胞因子高表達(dá)，其中與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的IL-1在各實(shí)驗(yàn)組中均呈高表達(dá)，LTA+LPS組與LPS組、LTA組比較，其凋亡相關(guān)細(xì)胞因子TNF-α、TNF-β，IL-1表達(dá)均明顯增加。
　　 結(jié)論：
　　 1.LTA和LPS作用于hPDLC后，其細(xì)胞凋亡率升高。
　　 2.TNF-α的分泌量與LTA及LPS作用呈明顯時(shí)間正相關(guān)。
　　 3.LTA和LPS作用后，hPDLC Fas、Cytochrome