白血病細胞凋亡的亞細胞蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、細胞凋亡是多細胞生物消除有害細胞的重要生理機制。在過去二十年中，有關(guān)細胞凋亡的發(fā)生、發(fā)展及其分子調(diào)控機制的研究已經(jīng)取得了十分矚目的進展。細胞凋亡的異常在許多疾病如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、自身免疫性疾病等的發(fā)病學上具有重要作用。如腫瘤發(fā)生過程中，往往伴隨腫瘤細胞對來自機體免疫系統(tǒng)及細胞內(nèi)凋亡調(diào)控機制的抵抗。相應(yīng)地，凋亡誘導(dǎo)藥物已經(jīng)成為腫瘤治療的重要途徑之一。本課題組先前曾在《Blood》雜志報道納摩爾濃度的NSC606985(一種新型喜樹堿

2、衍生物)能夠通過剪切活化蛋白激酶C8(PKCδ)，以時間-劑量依賴方式誘導(dǎo)急性粒細胞系白血病(AML)細胞凋亡。期間也與美國CornellUniversity合作，發(fā)現(xiàn)該化合物能誘導(dǎo)前列腺癌細胞凋亡。同時，本課題組進一步利用白血病小鼠模型，證實了NSC606985在白血病小鼠的體內(nèi)治療效應(yīng)。 本研究以該活性化合物分子探針，開展細胞凋亡相關(guān)的亞細胞蛋白質(zhì)組學研究。應(yīng)用經(jīng)典的雙向凝膠電泳-質(zhì)譜方法，分別比較NSC606985處理白血

3、病NB4細胞24小時前后細胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞漿組分蛋白質(zhì)表達譜的差異。結(jié)果顯示在細胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及細胞漿中分別發(fā)現(xiàn)96，38，38和41個差異蛋白點?？偣?13個差異點中，質(zhì)譜成功鑒定出189個差異點，為-90種獨立的蛋白質(zhì)，其中包括16種發(fā)生轉(zhuǎn)位的蛋白質(zhì)。這些蛋白根據(jù)其功能大致可分為代謝、DNA損傷修復(fù)和染色體裝配、轉(zhuǎn)錄和mRNA加工合成，修飾及蛋白降解、細胞骨架及膜轉(zhuǎn)運、氧化應(yīng)激、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及其他等八大類。這些研究結(jié)果已

4、經(jīng)在《Journal of proteome research》上發(fā)表。在上述這些差異蛋白中，我們證實存在于胞漿中的酸性亮氨酸磷酸核蛋白32B(ANP32B)在caspase-3活化之后被剪切。進一步研究顯示，ANP32B蛋白的剪切是凋亡過程中發(fā)生的普遍現(xiàn)象。在此基礎(chǔ)上，利用體外實驗結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)發(fā)現(xiàn)ANP32B是重要的凋亡誘導(dǎo)蛋白caspase-3的直接底物。通過定點致突變的方法識別出AEVD163為ANP32B序列上caspase-3