子宮內膜異位癥比較蛋白質組學研究及相關蛋白的鑒定與表達.pdf

1、研究背景：子宮內膜異位癥(內異癥)是生育年齡婦女的多發(fā)病、常見病，發(fā)病率呈明顯上升趨勢，可達15％～20％，占普通婦科手術的30％以上。內異癥所引起的痛經、下腹痛和性交痛等，嚴重地影響婦女的健康和生活質量，也是不育癥的主要病因之一。內異癥病變廣泛、形態(tài)多樣，極具侵襲和復發(fā)性，對臟器結構和功能的破壞與惡性腫瘤相當。但其發(fā)病機制目前尚不清楚，亦缺乏有效的臨床診斷和治療方法，缺乏特異性的生物學標志物。蛋白質組學技術作為生命科學里的前沿技術，具

2、有敏感、準確、高通量、快速的優(yōu)點，為內異癥的研究提供了強有力的工具。利用蛋白質組學技術篩選內異癥患者在位內膜和血清中差異表達的蛋白質，不僅有助于了解子宮內膜異位癥的發(fā)病機制，發(fā)現(xiàn)可以反映細胞的病理改變、與疾病發(fā)生發(fā)展有關的分子標志物，同時也為內異癥的診斷和導向治療打下基礎。 研究目的 對前期實驗中篩選的內異癥與和子宮腺肌癥中異常表達的蛋白質進行驗證；建立內異癥血清差異蛋白質表達譜，并對相關的差異蛋白進行驗證；建立內異癥血

3、清蛋白質指紋診斷及與卵巢癌的鑒別診斷模型，篩選差異蛋白質峰；以期探討內異癥的發(fā)病機制，尋找可以用于內異癥診斷的血清學標志物。 研究方法 1、應用Real-TimePCR、WesternBlot和免疫組化比較內異癥與非內異癥婦女在位內膜中stathmin和Annexin-1的表達。 2、應用雙向電泳結合MALDI-TOF-MS與生物信息學技術，篩選內異癥患者血清中差異表達的蛋白質，WesternBlot和免疫組化對

4、差異蛋白進行驗證。 3、應用SELDI-TOF-MS技術建立內異癥血清差異蛋白質指紋圖譜，建立內異癥診斷及其與卵巢癌、卵巢良性腫瘤的鑒別診斷模型。 結果 1、stathmin和Annexin-1在內異癥患者的在位內膜中均有高表達。 2、成功建立內異癥血清差異蛋白質譜，鑒定出12個差異蛋白質，與細胞骨架、細胞活動及能量代謝有關。 3、WesternBlot和免疫組化對血清差異蛋白CK1進行驗證，結果

5、顯示內異癥患者血清中CK1表達升高。 4、成功建立內異癥血清差異蛋白質指紋圖譜，篩選出26個差異蛋白質峰。 5、以M/Z為5632Da、8135Da兩個蛋白質建立的診斷模型對內異癥的診斷有較高的敏感性和特異性；血清中M/Z為5632Da的蛋白對內異癥與卵巢癌的鑒別診斷有較高的敏感性和特異性。 結論 1、stathmin和Annexin-1都是有重要功能的調控蛋白。本研究證明兩者在內異癥患者的在位內膜中均有

6、高表達，提示其可能參與內異癥的發(fā)生，再次表明在位內膜在內異癥發(fā)生過程中的重要作用。 2、應用雙向電泳結合質譜技術，發(fā)現(xiàn)內異癥與非內異癥婦女血清中存在差異蛋白，其中與細胞骨架、細胞活動及能量代謝有關的12個蛋白質在內異癥患者表達異常。這些蛋白可能參與內異癥的發(fā)生，并藉此可成為內異癥診斷及監(jiān)測的血清學標志物。 3、細胞角蛋白(CK)是一組細胞骨架蛋白，本研究發(fā)現(xiàn)CK1在內異癥患者血清中有高表達，亦可稱為內異癥之候選標志物。