Ad-ING4-IRES-IL-24對肺癌細胞抑癌增效和化療增敏的體外實驗研究.pdf

1、目的：研究ING4(腫瘤生長抑制因子4)和hIL-24(人白細胞介素24)雙基因共表達腺病毒載體對A549肺腺癌細胞體外抑癌增效及化療增敏作用。 方法：采用本室已構建的攜帶ING4/hIL-24雙基因共表達的重組復制缺陷型腺病毒載體(Ad-ING4-IRES-IL-24)感染QBI-293A細胞，并用該細胞進行病毒擴增和效價測定，用RT-PCR法鑒定ING4和IL-24基因轉錄。用50MOI的Ad-ING4-IRES-IL-24

2、作用于體外培養(yǎng)的人肺癌細胞A549和人胚肺成纖維細胞WI-38，用RT-PCR法鑒定目的基因的轉錄。用MTT法評價Ad-ING4-IRES-IL-24對兩種細胞生長的影響，繪制出細胞生長曲線。通過流式細胞術(FCM)和激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)檢測Ad-ING4-IRES-IL-24對A549細胞凋亡的影響。免疫細胞化學分析凋亡相關因子Bax，Bcl-2，Caspase3的變化，探討Ad-ING4-IRES-IL-24誘導肺癌細胞

3、凋亡的主要機理。用Ad-ING4-IRES-IL-24聯(lián)合化療藥物順鉑(DDP)觀察其對肺癌細胞化療的增敏作用。MTT法檢測兩者聯(lián)合作用后對A549細胞的生長抑制作用，流式細胞術檢測其凋亡率。激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)檢測Ad-ING4-IRES-IL-24聯(lián)合化療藥物順鉑(DDP)對A549細胞凋亡的影響。 結果：Ad-ING4-IRES-IL-24可在QBI-293A細胞中增殖，48h后在倒置顯微鏡下可見細胞變圓，呈葡

4、萄狀聚集，倒置熒光顯微鏡下可見綠色熒光，呈現(xiàn)高感染效率。RT-PCR檢測可見ING4和IL-24基因成功轉錄。病毒效價檢測為108pfu/ml。Ad-ING4-IRES-IL-24作用A549細胞和WI-38細胞后，RT-PCR結果顯示目的基因均可在上述兩種細胞中成功轉錄，并能顯著抑制A549細胞的生長，并呈現(xiàn)時間依賴性和劑量依賴性，但對WI-38細胞無明顯抑制作用。Ad-ING4-IRES-IL-24感染A549細胞后，其雙基因表達對

5、A549細胞的生長抑制作用和誘導細胞凋亡效應明顯優(yōu)于單基因處理組，具抑癌增效功能，其凋亡機制與活化的Caspase3表達水平和Bax/Bcl-2比值升高有關。Ad-ING4-IRES-IL-24聯(lián)合順鉑(DDP)，對A549細胞的生長抑制率和誘導細胞凋亡率均明顯優(yōu)于雙基因組和單-DDP化療組，具有化療增敏作用。 結論：重組腺病毒Ad-ING4-IRES-IL-24具有抑制A549肺癌細胞生長和誘導凋亡的抑癌增效和化療增敏作用，可