不同證候食管癌組織差異蛋白組學(xué)研究.pdf

1、　　目的本研究運(yùn)用蛋白組學(xué)技術(shù)鑒定不同證候食管鱗癌組織、癌旁組織和正常食管粘膜組織差異表達(dá)蛋白質(zhì),尋找食管癌不同階段和不同證候相關(guān)表達(dá)蛋白,探討食管鱗癌的癌變機(jī)理和食管鱗癌證候發(fā)生分子病機(jī)。
　　方法按照標(biāo)準(zhǔn)收集痰氣交阻型( P)、瘀血內(nèi)結(jié)型( B)、津虧熱結(jié)型( F)和氣虛陽(yáng)微型( Q)四種中醫(yī)證型食管癌患者病例樣品,采用雙向凝膠電泳(2-DE)技術(shù)電泳分離患者癌組織、癌旁組織與正常食管組織組織蛋白,利用 ImageMaste

2、r 2D Platinum 軟件對(duì)凝膠圖像進(jìn)行蛋白點(diǎn)的尋點(diǎn)、定量和匹配及統(tǒng)計(jì)分析,在此我們認(rèn)定百分比灰度(%Volume)大于 2 倍且具有重復(fù)性的蛋白點(diǎn)是差異蛋白點(diǎn)。蛋白樣品用 4700 串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀[4700 Proteomics Analyzer (TOF/TOFTM) (Applied Biosystems , USA)]進(jìn)行質(zhì)譜分析,所得結(jié)果用 GPS(Applied Biosystems, USA) –MASCOT (

3、Matrix Science, London, UK)進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)檢索。
　　結(jié)果1 進(jìn)一步改進(jìn)食管癌組織蛋白質(zhì)樣品的提取制備技術(shù)方法,獲得了圖像清晰、重復(fù)性較好的不同證型食管癌正常組織、癌旁組織與正常組織雙向凝膠電泳圖像 12 張,為鑒定分析食管癌發(fā)生相關(guān)聯(lián)蛋白奠定前期基礎(chǔ)。
　　2 從食管癌癌組織、癌旁組織和正常組織之間篩選出差異蛋白 44 個(gè)2 9 種,其中癌組織與癌旁組織差異蛋白 1 3 個(gè),1 0 個(gè)上升表達(dá),3

4、 個(gè)表達(dá)下降；癌組織與正常粘膜差異蛋白 14 個(gè),其中 7 個(gè)上升表達(dá), 7 個(gè)表達(dá)下降；癌旁組織與正常組織比較發(fā)現(xiàn)差異蛋白 17 個(gè),其中 8 個(gè)上升表達(dá), 9 個(gè)表達(dá)下降。
　　3 不同證型食管癌組織之間：P 組與 B 組,P組癌組織中蛋白表達(dá)上調(diào) 2 種,未發(fā)現(xiàn)下調(diào)蛋白；癌旁組織中表達(dá)上調(diào)蛋白 2 種,下調(diào) 6 種；正常組織中表達(dá)上調(diào)蛋白1種,下調(diào) 4 種。P 組與F組比較,P組表達(dá)上調(diào)蛋白 3 種,下調(diào)蛋白 2 種；癌旁

5、組織中表達(dá)上調(diào)蛋白1種,下調(diào)12種；正常組織中表達(dá)上調(diào)蛋白1種,下調(diào) 8 種。P 組與 Q 組比較,P 組癌組織表達(dá)上調(diào)蛋白1種,下調(diào)蛋白 6 種；癌旁組織中表達(dá)上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 12 種；正常組織中表達(dá)上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 8 種。B組與F組比較,B組癌組織表達(dá)上調(diào)蛋白 2 種,下調(diào)蛋白 2 種；癌旁組織中表達(dá)上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 4 種；上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 4 種。B 組與 Q 組比較,B組癌組織中表達(dá)上調(diào)蛋白 2 種

6、,下調(diào)蛋白 2 種；癌旁組織中下調(diào)蛋白有 4種,未發(fā)現(xiàn)上調(diào)蛋白；正常組織中上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào) 8 種。F 組與 Q 組比較,F 組癌組織表達(dá)上調(diào)蛋白 1 種,下調(diào)蛋白 6 種；癌旁組織中下調(diào)蛋白 2 種,上調(diào)蛋白 2 種；正常組織中表達(dá)上調(diào)蛋白 3 種,下調(diào) 2 種。
　　4 對(duì)食管癌不同階段篩選出的蛋白進(jìn)行信號(hào)通路分析,篩選出的主要 信 號(hào) 通 路 為 Hypertrophic cardiomyopathy (HCM) 、

7、 Dilated cardiomyopathy phath way、和 Vascular smooth muscle contraction Pathway 通路相關(guān),另外,對(duì)存在的差異蛋白進(jìn)行 GO 富集分析,將其分子功能、生物過(guò)程進(jìn)行研究,選取 p-value 小于 0.05 為有意義的目標(biāo),發(fā)現(xiàn)不同證型食管癌各自主要與細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)、蛋白磷酸化、乙?；被Y(jié)束、鈣結(jié)合調(diào)節(jié)等功能相關(guān)
　　結(jié)論1 食管癌不同階段有差異表達(dá)蛋白。

8、主要涉及到激活蛋白激酶 C 通路( PKC)-肌球蛋白磷酸酶抑制劑參與通路、活化 T 細(xì)胞因子通路、細(xì)胞粘附信號(hào)通路、鈣調(diào)蛋白( CAM )核因子活化的 T 細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等通路。
　　2 不同證候食管癌組織有差異表達(dá)蛋。其信號(hào)傳導(dǎo)通路主要涉及血管平滑肌收縮通路、肥厚型心肌病( HCM)通路等信號(hào)傳導(dǎo)通路；能夠初步證明蛋白表達(dá)與證型的相關(guān)性。痰氣交阻證型組中蛋白表達(dá)主要與細(xì)胞骨架功能、細(xì)胞凋亡、蛋白磷酸化等相關(guān)；瘀血內(nèi)結(jié)型蛋白功能