廣地龍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究及地龍凝膠劑的研制.pdf

1、1. 目的 為了更好地控制廣地龍配方顆粒的質(zhì)量，保證臨床療效，本研究在中醫(yī)藥理論和《中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的技術(shù)要求》指導(dǎo)下，對(duì)廣地龍飲片入選標(biāo)準(zhǔn)、廣地龍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行系統(tǒng)研究，對(duì)指標(biāo)成分次黃嘌呤和琥珀酸進(jìn)行藥效學(xué)驗(yàn)證。同時(shí)研制地龍凝膠劑并進(jìn)行初步的藥效學(xué)評(píng)價(jià)。 2. 方法 研究?jī)?nèi)容主要包括：廣地龍飲片的入選標(biāo)準(zhǔn)，廣地龍配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及穩(wěn)定性研究，指標(biāo)成分次黃嘌呤和琥珀酸止咳平喘的藥效學(xué)驗(yàn)證，地龍

2、凝膠劑的制備及治療燙傷的藥效學(xué)初探等。 廣地龍飲片入選標(biāo)準(zhǔn)研究中，采用薄層色譜法鑒別氨基酸、琥珀酸及氯仿提取物，建立高效液相色譜法及高效毛細(xì)管電泳法分別測(cè)定次黃嘌呤和琥珀酸含量的方法。高效液相法測(cè)定次黃嘌呤含量的色譜條件：色譜柱為ODS-EP 5μm ,4.6 mm×150 mm，流動(dòng)相為水-甲醇-四氫呋喃（100﹕0.5﹕0.5），流速為1.0 ml/ min ，檢測(cè)波長(zhǎng)λ=254nm，柱溫為室溫，理論板數(shù)按次黃嘌呤峰計(jì)算不低

3、于3888。高效毛細(xì)管電泳測(cè)定琥珀酸含量的條件：以未涂層融硅毛細(xì)管（50 cm×75μm）為分離柱，1mmol/L Tris-10mmol/L H3BO3-0.5％ 四乙烯五胺-0.025 mmol/L CTAB （pH=11.45)體系為電泳介質(zhì)，分離電壓為-10KV。還對(duì)廣地龍飲片進(jìn)行雜質(zhì)、水分及浸出物等項(xiàng)目的檢查。 配方顆粒采用傳統(tǒng)湯劑的制備方法，并通過離心除雜、噴霧干燥及制粒獲得。以次黃嘌呤的含量為指標(biāo)，用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)

4、選有效成分的最佳提取工藝。 配方顆粒的薄層鑒別和含量測(cè)定與飲片類似，并按照2005 版中國(guó)藥典一部規(guī)定的顆粒劑項(xiàng)下對(duì)廣地龍配方顆粒裝量差異、溶化性和含水量進(jìn)行檢查。 初步穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)采用實(shí)驗(yàn)室留樣觀察三個(gè)月。指標(biāo)成分的藥效學(xué)驗(yàn)證分別以組胺和乙酰膽堿混合溶液引喘法及霧化氨水引咳法來評(píng)價(jià)次黃嘌呤和琥珀酸的止咳平喘作用。 地龍凝膠劑的制備選用卡波姆為凝膠基質(zhì)，并含有甘油和丙二醇等附加成分。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)則分別以燙傷后面積，

5、含水量，羥脯氨酸含量變化以及肉眼觀察和病理切片來評(píng)價(jià)。 3. 結(jié)果 廣地龍飲片入選標(biāo)準(zhǔn)研究中改進(jìn)了2005 版中國(guó)藥典一部地龍項(xiàng)下氨基酸薄層鑒別方法，增加丙氨酸的斑點(diǎn)，并增加了琥珀酸的斑點(diǎn)鑒別；HPLC 測(cè)得不同產(chǎn)地的廣地龍次黃嘌呤含量為0.54～1.25 mg/g；HPEC 測(cè)得藥材中琥珀酸(產(chǎn)地：廣西)含量為0.8mg/g。 廣地龍配方顆粒制備研究中，確定最佳提取工藝條件為：取廣地龍30g，剪碎，加入12

6、 倍量的水，浸泡1 小時(shí)，煎煮3 次，過濾，合并煎煮液，濃縮。 廣地龍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中，配方顆粒的次黃嘌呤含量測(cè)定方法色譜條件與飲片一致，不同批號(hào)的配方顆粒次黃嘌呤含量為1.5～3.3mg/袋。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)室留樣觀察三個(gè)月，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目檢查，包括外觀、鑒別、檢查、含量測(cè)定、衛(wèi)生學(xué)，均符合規(guī)定。 小鼠的哮喘和咳嗽實(shí)驗(yàn)證明次黃嘌呤、琥珀酸有止咳平喘療效。選擇這兩個(gè)成分作為指標(biāo)成分是合理的。 地龍凝膠劑治

7、療燙傷實(shí)驗(yàn)中受傷面積數(shù)據(jù)表明廣地龍無糖凝膠和廣地龍含糖凝膠對(duì)燙傷有治療作用。含水量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明廣地龍無糖凝膠和廣地龍含糖凝膠可減少水腫。羥脯氨酸含量測(cè)定數(shù)據(jù)表明廣地龍含糖凝膠使?fàn)C傷部位恢復(fù)較快。 4. 結(jié)論 本研究建立的廣地龍飲片和配方顆粒質(zhì)量控制方法規(guī)范，科學(xué)，通過藥效學(xué)的驗(yàn)證，說明以次黃嘌呤和琥珀酸含量作為控制廣地龍飲片及配方顆粒質(zhì)量的合理性，為廣地龍及其產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。另外本課題對(duì)廣地龍促進(jìn)傷口的愈合