斑蝥酸鈉維生素B6對(duì)肝癌MAPK、JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控作用.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌是人類常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重的危害我國人民的生命和健康。研究表明酪氨酸蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用，在肝癌細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)鏈中涉及多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，起主要作用的有促進(jìn)細(xì)胞增殖并調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的Ras/Raf/MAPK途徑和調(diào)節(jié)效應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄的JAK-STAT途徑。中藥斑蝥具有抗腫瘤活性，對(duì)宮頸癌、鼻咽癌、皮膚癌、骨髓瘤、白血病、卵巢癌及肝癌細(xì)胞等有抑制作用。本研究利用斑蝥活性成分斑蝥酸鈉維生素B6（Sodi

2、um Cantharidinate and Vitamin B6，SCVB6）作用于肝癌SMMC-7721細(xì)胞株，以MEK途徑特異性抑制劑PD98059及U0126作為對(duì)照，觀察SCVB6對(duì)肝癌細(xì)胞的MAPK、JAK-STAT信號(hào)通路的影響。
　　 方法：1、MTT法檢測(cè)SCVB6、SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞株增殖的影響；
　　 2、RT-PCR法檢測(cè)SCVB6、SCV

3、B6+PD98059、SCVB6+U0126對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞erk、stat3、stat5、c-junmRNA的影響；
　　 3、Western blotting法檢測(cè)SCVB6、SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表達(dá)的影響；
　　 4、激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)SCVB6、SCVB

4、6+PD98059、SCVB6+U0126對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞 ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：1、MTT結(jié)果示：SCVB6能夠抑制SMMC-7721細(xì)胞增殖，呈濃度-時(shí)間依賴性。PD98059或U0126與SCVB6聯(lián)合應(yīng)用48h后對(duì)細(xì)胞增殖的抑制率升高，與單獨(dú)應(yīng)用SCVB648h相比差異有顯著性（P<0.05）。
　　 2、R

5、T-PCR結(jié)果示：SCVB6作用于肝癌SMMC-7721細(xì)胞48h后，erk、stat3、stat5、c-jun mRNA表達(dá)量均有明顯下降，與對(duì)照組比較差異有顯著性（P<0.05）。
　　 SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126組作用于SMMC-7721細(xì)胞48h后，erk、stat3、stats、c-jun mRNA的表達(dá)量比對(duì)照組降低，差異有顯著性（P<0.05）。與SCVB6組相比較，SCVB6+PD9805

6、9、SCVB6+U0126組erk、stat3、stat5 mRNA的表達(dá)量降低，差異有顯著性（P<0.05）。
　　 3、Western blotting結(jié)果示：SCVB6作用于肝癌SMMC-7721細(xì)胞48h后，ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表達(dá)量均有下降，與對(duì)照組比較差異有顯著性（P<0.05）。
　　 SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126作

7、用于SMMC-7721細(xì)胞48h后，ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表達(dá)量和對(duì)照組比較顯著降低（P<0.05）。與SCVB6組相比較，SCVB6+PD98059作用于SMMC-7721細(xì)胞48h后蛋白STAT3、P-STAT3、C-JUN表達(dá)量均有下降，差異有顯著性（P<0.05）。SCVB6+U0126組與SCVB6組相比較ERK、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C

8、-JUN蛋白表達(dá)量下降，差異有顯著性（P<0.05）。
　　 4、激光共聚焦結(jié)果示：SCVB6作用于SMMC-7721細(xì)胞48h后，ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN抗體的熒光強(qiáng)度均較對(duì)照組降低，其中P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN更明顯。
　　 SCVB6+PD98059、SCVB6+U0126組ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-S

9、TAT3、P-STAT5、C-JUN抗體的熒光強(qiáng)度均顯著降低。
　　 結(jié)論：1、SCVB6能下調(diào)肝癌細(xì)胞erk、stat3、stat5、c-junmRNA表達(dá)水平，降低ERK、STAT3、STAT5蛋白激酶的磷酸化水平及下游信號(hào)C-JUN的表達(dá)，從基因轉(zhuǎn)錄和蛋白活化兩個(gè)水平抑制MAPK、JAK-STAT通路及其下游信號(hào)的傳遞，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。
　　 2、SCVB6能增強(qiáng)PD98059、U0126對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的抑