雌性配子與人類三原核囊胚的玻璃化冷凍研究.pdf

1、目的比較不同冷凍方法對小鼠成熟卵母細胞的凍存率和凍后發(fā)育潛能的影響，試圖建立玻璃化冷凍技術平臺，為人類卵母細胞玻璃化冷凍提供理論與技術參考。 方法 以我國廣泛使用的昆明品系小鼠為實驗材料，以玻璃化冷凍技術為基本方法凍存小鼠成熟卵母細胞。本研究分為新鮮周期對照組和玻璃化冷凍組、玻璃化冷凍組又再分為開放式拉長麥管(OPS)組、自制麥管組和冷凍葉片(cryoleaf)組，比較它們的存活率、受精率、卵裂率和囊胚形成率。

2、 結果 新鮮周期對照組和玻璃化冷凍組之間受精率差異無顯著性，卵裂率亦無顯著性差異(P>0.05)，但是囊胚形成率之間存在顯著性差異(P<0.05)；OPS組與自制麥管組之間存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率之間均沒有顯著性差異(P>0.05)；OPS組與cryoleaf組比較存活率之間存在顯著性差異(P<0.05)，受精率、卵裂率、囊胚形成率之間均沒有顯著性差異(P>0.05)；自制麥管組與cryoleaf組之間比較也是存活率之

3、間存在顯著性差異(P<0.05)，而受精率、卵裂率、囊胚形成率之間沒有顯著性差異(P>0.05)。 結論 1、初步建立了小鼠卵母細胞玻璃化冷凍技術平臺：2、OPS法和cryoleaf法均可以用于冷凍昆明小鼠卵母細胞，但cryoleaf法更安全可靠。 目的 比較分析體外培養(yǎng)成熟卵母細胞及不同成熟階段卵母細胞冷凍后的受精和發(fā)育能力，研究玻璃化冷凍未成熟卵母細胞的有效性，以期能夠拓展配子冷凍的領域。

4、方法 將進行單精子胞漿內注射治療周期中剩余的GV期卵母細胞作為研究對象，根據有無顆粒細胞將實施玻璃化冷凍的GV期卵母細胞分為含顆粒細胞組和不含顆粒細胞組；另外，又將正常IVM作為對照組，將其與GV期玻璃化冷凍組及GV．期卵母細胞體外培養(yǎng)至MⅡ期卵母細胞實施玻璃化冷凍組共三組，并對它們的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率進行比較。 結果 含顆粒細胞組和不含顆粒細胞組之間的成熟率比較存在顯著性差異(P<0.0

5、5)，而存活率、受精率、2細胞形成率、>2細胞形成率之間均沒有顯著性差異(P>0.05)。另外，IVM組與GV?；M之間成熟率、受精率、卵裂率均存在顯著性差異(P<0.05)，其中成熟率與卵裂率差異極顯著(P<0.01)；IVM組與GV期卵母細胞體外培養(yǎng)至MⅡ期卵母細胞?；M間成熟率、受精率、卵裂率之間都存在顯著性差異(P<0.05)，其中，成熟率之間差異極顯著(P<0.01)；GV玻化組與GV期卵母細胞體外培養(yǎng)至MⅡ期卵母細胞?；M之