富勒烯衍生物對(duì)A549細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、納米科技的高速發(fā)展使得納米材料被越來越多的應(yīng)用在各個(gè)領(lǐng)域。富勒烯因其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu),優(yōu)異的理化性質(zhì)而受到人們廣泛的關(guān)注。作為富勒烯重要成員的C60和C70,由于特殊的性質(zhì)及易于制備、易于修飾等優(yōu)點(diǎn)有望在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。目前對(duì)于C60及其衍生物的生物效應(yīng)已有較多研究,但有關(guān)C70富勒烯還缺乏深入系統(tǒng)的研究。
　　 本文結(jié)合細(xì)胞生物學(xué)研究新進(jìn)展,以人肺腺癌細(xì)胞株A549作為模型細(xì)胞,著重探討了C70富勒烯衍生物對(duì)A549細(xì)

2、胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及機(jī)制,并與目前研究較多的C60衍生物作比較。主要研究?jī)?nèi)容和取得的結(jié)果如下:
　　 1.設(shè)計(jì)合成了三種富勒烯衍生物:C70丙二酸衍生物,羥基化修飾的C70和羥基化修飾的C60。通過FI-TR、XPS、MS、SEM、TEM、AFM和Zeta potential等分析方法對(duì)制備得到的三種富勒烯衍生物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。表征結(jié)果表明,三種富勒烯衍生物的分子式為:C70(C(COOH)2)4,C70(OH)34和C6

3、0(OH)24,粒徑大約為:70 nm、35 nm、110 nm,且粒徑分布均勻,具有良好的分散性和穩(wěn)定性。
　　 2.在H2O2誘導(dǎo)A549細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型基礎(chǔ)上,以CCK-8比色分析法,Hoechst33342熒光染色法分析了細(xì)胞活性變化情況;以活性氧捕獲劑DCFH-DA為標(biāo)記探針,利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生情況;以Fluo-3 AM探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Ca2+的變化情況,以及通過Annexin V/PI為標(biāo)記

4、探針檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況,來觀察富勒烯衍生物對(duì)H2O2誘導(dǎo)A549細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用。結(jié)果顯示,三種富勒烯衍生物具有良好的細(xì)胞相容性,且可以抑制H2O2處理導(dǎo)致的細(xì)胞活性降低、細(xì)胞核固縮變小、ROS升高、Ca2+濃度升高以及細(xì)胞凋亡。
　　 3.探討了富勒烯衍生物對(duì)A549細(xì)胞氧化應(yīng)激抑制作用的機(jī)制。對(duì)A549細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(MDA)和三種抗氧化酶(SOD、GSH-Px和CAT)進(jìn)行檢測(cè),運(yùn)用化學(xué)顯色法對(duì)A549細(xì)胞的

5、caspase-3活性變化進(jìn)行分析,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析了三種富勒烯衍生物對(duì)A549細(xì)胞線粒體膜電位的影響,同時(shí)在體外研究了三種富勒烯衍生物對(duì)DPPH自由基的清除作用。結(jié)果顯示:三種富勒烯衍生物可以抑制H2O2處理所導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量升高和抗氧化酶活性降低,可以抑制H2O2處理所導(dǎo)致線粒體去極化以及caspase-3活性升高,三種富勒烯衍生物都表現(xiàn)出對(duì)自由基的清除作用,效率大小為:C70(OH)34>C60(OH)24>C70(C(