小鼠腎臟缺血再灌注損傷模型建立及促紅細胞生成素通過HO-1對小鼠腎臟缺血再灌注損傷保護.pdf

1、目的：急性腎功能衰竭(ARF)是一種常見且嚴重的臨床綜合征，預后不良且療效差強人意。近年在臨床研究中發(fā)現(xiàn)抗氧化治療能成功的防治ARF：動物實驗中針對HO、NOS、PPARs系統(tǒng)及抗炎抗氧化應激等途徑也進行了大量有益的探索。這為有效干預缺血性ARF提供了新的思路。本實驗旨在探討建立穩(wěn)定的、適合的小鼠腎臟缺血再灌注損傷模型并評估缺血模型的影響因素，在此基礎(chǔ)上觀察重組人促紅細胞生成素(rhEPO)對小鼠腎臟缺血再灌注損傷(IR）血紅素加氧酶-

2、1（HO-1） mRNA表達的影響，以探討rhEPO對IR的保護作用。
　　 方法：應用無損傷動脈夾夾閉小鼠單側(cè)腎蒂制備急性單腎缺血-再灌注腎損傷模型, 于術(shù)后24h后處死觀察腎功能及腎臟病理變化。在此基礎(chǔ)上進一步根據(jù)缺血時間、手術(shù)時體溫的控制、飲食情況進行分組，進行單腎缺血再灌注，于術(shù)后24h后處死觀察腎功能及腎臟病理變化。確定好實驗條件后將28只雄性C57BL/6N小鼠隨機分為四組：假手術(shù)組（n=7）、腎IR組（n=7）、r

3、hEPO+Sham組（n=7）及rhEPO+IR組（n=7），并在相應時間點進行腎功能檢測（血肌酐）、PAS染色評估腎組織形態(tài)學變化情況以及TUNEL染色分析和比較各組凋亡細胞數(shù)量的變化，Real-time PCR檢測腎臟組織中血紅素氧化酶-1（HO-1）、白細胞介素6（IL-6）mRNA表達。
　　 結(jié)果：造模成功率均達87.5％以上;術(shù)后24h實驗組血清肌酐(Scr)水平明顯升高。在缺血時間分析中：與Sham組相比，隨著缺血

4、時間的延長，Scr程度加重，且腎組織形態(tài)學改變加重。但缺血25min和缺血30min無統(tǒng)計學意義。在手術(shù)溫度結(jié)果分析中：與Sham組相比，常溫IRI組小鼠發(fā)生中等程度腎損傷，其Scr升高，腎組織形態(tài)學改變。高溫明顯加重小鼠的IRI損傷(P<0．05)，輕度低溫對小鼠IRI具有保護作用。飲食結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)：是否禁食不能影響IRI結(jié)果。rhEPO對于腎缺血再灌注損傷的保護實驗中納入動物28只，均進入結(jié)果分析。統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，①重組人促紅細胞生

5、成素干預組腎組織中HO-1 mRNA表達水平與腎缺血再灌注損傷組相比顯著升高而IL-6 mRNA水平則降低（P<0.05）。②重組人促紅細胞生成素干預組血肌酐含量與腎缺血再灌注損傷組相比降低（P<0.05）。③重組人促紅細胞生成素干預組腎臟病變與腎缺血再灌注組比較明顯減輕，大片壞死區(qū)明顯減少，僅見局灶性小管壞死，很少見管型和壞死細胞，間質(zhì)充血、出血明顯減輕。④TUNEL染色示，與假手術(shù)組相比，IR組凋亡細胞數(shù)量明顯增多（P<0.05），