甘蔗葉多糖提取純化及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：本文以甘蔗葉為研究對象，對其所含水溶性多糖進行提取工藝、純化工藝、純度驗證及體外抗腫瘤活性研究，為深入研究甘蔗葉多糖及進一步開發(fā)利用提供科學依據。
　　方法：采用L9(3)4多指標正交實驗考察甘蔗葉多糖最佳提取工藝。通過水提醇沉得到粗多糖，采用膜分離、脫蛋白、硅膠柱色譜、DEAE脫色、葡聚糖凝膠柱色譜等現代分離方法和技術對粗多糖進行分離純化研究，利用葡聚糖凝膠柱色譜、理化檢驗、紫外可見光譜、紅外光譜進行多糖純度驗證，精制多糖

2、完全水解后進行高效液相分析，解析其單糖組成；采用苯酚-硫酸法動態(tài)累積測定廣西甘蔗研究所采集的2009年30個品種和2010年20個品種甘蔗葉中粗多糖的含量。以半數抑制濃度(IC50)為考察指標，篩選純化多糖對6種癌細胞的體外抗腫瘤活性。
　　結果：甘蔗葉粗多糖提取的最佳條件為料液比1:30，于100℃提取3次，每次5h，以純凈水為提取溶劑，水浴恒溫提取得率最高。提取后的粗多糖采用Sevage試劑脫蛋白、硅膠柱脫色素效果最優(yōu)，葡聚糖

3、凝膠柱處理后首次分離純化得到純度達到84.93％的水溶性甘蔗葉多糖，對其進行水解后，高效液相分析表明其主要由果糖和葡萄糖構成。紅外分析表明甘蔗葉水溶性多糖在4000~500cm-1范圍內具有呋喃糖類物質的特征吸收峰。2009年5個月份動態(tài)累積結果顯示：桂糖02-237(66.54 mg·g-1)，桂引Q-190(63.41 mg·g-1)，桂Q-170(58.25mg·g-1)三個品種的多糖平均含量和總量均為（8~12月）最高。2010

4、年6個月份動態(tài)累積結果顯示：桂糖02-237(31.42mg· g-1)，桂糖02-770(30.49mg· g-1)和桂糖97-69(28.12mg·g-1)三個品種的多糖平均含量和總量均為（7~12月）最高。在15.625~250μg·mL-1范圍內甘蔗葉多糖對 Bel7404，SK-OV-3，NCI-H460，CNE腫瘤細胞表現出較弱的抑制作用，IC50分別為3.45μg·ml-1，17.01μg·ml-1，52.6μg·ml-1

5、和41.65mg·ml-1；對 Hela和Caco-2腫瘤細胞未表現出抑制作用。
　　結論：本文確定的甘蔗葉多糖提取工藝穩(wěn)定，合理。分離純化得到的多糖純度較高，紅外分析表明其甘蔗葉水溶性多糖為呋喃糖。其對Bel7404，SK-OV-3，NCI-H460，CNE4種腫瘤細胞的增殖抑制率隨著多糖溶液濃度的增高而有所提高，存在一定的劑量依賴性。由此可以確定甘蔗葉多糖對以上4種腫瘤細胞在較高濃度時具有一定的抗腫瘤活性。且多糖液具有無任何毒