熊果酸誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2Z凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討熊果酸誘導(dǎo)人鼻咽癌細(xì)胞CNE-2Z凋亡的作用機(jī)制。 方法：用不同濃度的熊果酸處理CNE-2Z細(xì)胞，采用：①四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT)檢測(cè)熊果酸對(duì)CNE-2Z細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)；②流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析細(xì)胞周期和凋亡率；③應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因bcl-2,bax和cox-2表達(dá)的變化；④Western blot檢測(cè)CNE-2Z細(xì)胞內(nèi)caspase 3的表達(dá)。 結(jié)果：1、MTT：熊果酸處理24

2、h，48h和72h時(shí)的IC50分別為30.56μmol/L，31.94μmol/L和33.06μmol/L。熊果酸呈濃度依賴(lài)性的抑制CNE-2Z細(xì)胞增殖，差異有顯著性(P＜0.05)。40-50μmol/L熊果酸分別作用24h、48h、72h后，CNE-2Z細(xì)胞幾乎停止增殖。2、FCM：經(jīng)熊果酸作用24h后，隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞凋亡率逐漸升高，S期細(xì)胞的比例逐漸下降，G0/G1期細(xì)胞的比例逐漸增加，主要呈現(xiàn)G0/G1期阻滯，并存在濃

3、度依賴(lài)性。3、免疫組化SP法：bcl-2,bax和cox-2的表達(dá)可見(jiàn)于胞膜和胞漿，在24h時(shí)隨著藥物濃度的升高，bax的表達(dá)逐漸增強(qiáng)；bcl-2和cox-2與對(duì)照組比較表達(dá)則明顯降低。4、Western blot：用10～50μmol/L UA處理細(xì)胞24 h后，隨著UA濃度增加，活化的caspase3蛋白條帶逐漸加深。用Quantity One分析軟件測(cè)定條帶灰度值，求出每組caspase 3與β-actin條帶的灰度比值，實(shí)驗(yàn)組與