復方丹參注射液保護離體缺血再灌注大鼠心肌的研究.pdf

1、研究目的 心肌缺血再灌注損傷(Ischemiareperfusioninjury，IRI)是指短時間內，心肌血供中斷一定時間后恢復血液供應，原缺血心肌發(fā)生較血液供應恢復前更嚴重的損傷。在臨床上，表現(xiàn)為閉塞的冠狀動脈再通一定時間后，病人發(fā)生血壓驟降，心功能不全，心律不齊或者猝死等一系列病情發(fā)生惡化的現(xiàn)象。對于心肌缺血再灌注損傷的發(fā)生機制還沒有完全清楚，比較公認的有：鈣超載，氧自由基和活化的中性白細胞的作用。對于心肌缺血再灌注損傷中損傷性

2、因素的研究，可以為缺血再灌注損傷找到有效的防治途徑。研究表明，細胞內鈣超載在心肌缺血再灌注損傷發(fā)病機制中起重要作用。 第一部分：將12只大鼠隨機分成2組，對照組即Krebs液灌注20分鐘后缺血30分鐘，再灌注30分鐘。實驗組即含有復方丹參注射液的Krebs液灌注20分鐘后，缺血30分鐘，再灌注30分鐘。觀察離體大鼠心臟的血流動力學的變化，以及發(fā)生缺血再灌注后心肌乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase，LDH)的變化

3、和心肌梗死面積的變化，來評價復方丹參注射液對離體大鼠心肌的保護作用。 第二部分：再灌注結束后，提取心肌肌漿網(wǎng)(sarcoplasmicreticulum，SR)，觀察對照組與實驗組大鼠心肌肌漿網(wǎng)依賴鈣離子ATP酶(sarcoplasmicreticulumcalciumATPaseSERCA)攝取鈣離子能力的變化，以解釋丹參減輕細胞內發(fā)生鈣超載的可能機制。 實驗方法 第一部分：(1)大鼠用乙醚麻醉后迅速取出心臟，1分鐘

4、之內接到Langendorff裝置上進行灌流。灌流液使Krebs-Henseleit液，同時給予95％的氧氣和5％的二氧化碳混合氣體。分別接受主動脈的泵出液和心肌的冠狀動-1-脈的回流液。(2)用紫外分光光度計，測定LDH的活性(3)TTC方法染色，觀察心肌再灌注損傷的情況第二部分：提取SR，測定蛋白濃度，根據(jù)SERCA攝取鈣離子反應體系的要求，加入相應的反應物和離子，借助紫外分光光度計，觀察SERCA鈣攝取的變化。反應溫度25℃，檢測

5、波長710nm，檢測間隔0.1秒。時間100秒。 實驗結果 第一部分：1.對照組與實驗組血流動力學的變化比較對照組與實驗組的12只大鼠的心率(273±28.33vs.280±22.54，P＞0.05)在250-300次/分左右，收縮壓在(81.16±21.26vs.80.35±19.23，P＞0.05)在70-100mmHg的范圍之內，全部符合離體大鼠心臟Langendorff灌注的血流動力學標準。 對照組與實驗組的血

6、流動力學指標如心率(heartrate，HR)，分別在5分鐘(262.4±7.7vs.265.3±10.2，P＞0.05)，10分鐘(256.9±14.5vs.264.2±19.5，P＞0.05)，15分鐘(243.8±18.5vs.262.6±20.1，P＞0.05)，20分鐘(247.9±15.2vs.263.7±19.6，P＞0.05)組間無統(tǒng)計學意義。對照組與實驗組收縮壓(systolicpressure，SP)，分別在5分鐘(

7、81.2±8.4vs.82.4±10.2，P＞0.05)，10分鐘(79.4±14.5vs.79.6±17.3，P＞0.05)，15分鐘(80.1±18.5vs.78.6±20.1，P＞0.05)，20分鐘(78.8±15.2vs.78.9±19.6，P＞0.05)組間無統(tǒng)計學意義。對照組與實驗組冠狀動脈流量(coronaryarteryflux，CF)，在5分鐘(14.1±8.4vs.14.6±6.8，P＞0.05)時無統(tǒng)計學意義。1

8、0分鐘(13.7±10.5vs16.6±15.8，P＜0.05)，15分鐘(13.1±14.2vs.17.4±18.3，P＜0.05)，20分鐘(13.3±12.2vs.18.8±20.8，P＜0.05)組間均有統(tǒng)計學意義。對照組與實驗組心輸出量(cardiacoutput，CO)在5分鐘(53.0±8.4vs.52.0±6.8，P＞0.05)無統(tǒng)計學意義。10分鐘(51.7±10.5vs.57.2±15.8，P＜0.05)，15分鐘(

9、5L0±14.2vs.58.8±18.3，P＜0.05)，20分鐘(50.6±12.2vs.59.8±20.8，P＜0.05)組間有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 在30分鐘缺血中，心臟在保溫裝置中，溫度保持在37℃。 2.再灌注后對照組與實驗組CF中LDH的變化再灌注后，對照組冠狀動脈流出液中的LDH活性高于實驗組(136.7±13vs.30.6±6.2，P＜0.05)，有統(tǒng)計學意義。 3.再灌注后對照組與實驗組

10、心肌梗死面積的比較對照組與實驗組的心臟在再灌注后，用TTC染色的方法檢測梗死面積的變化，對照組與實驗組的心肌均出現(xiàn)了心肌梗死區(qū)，對照組的心肌梗死面積的百分比更大(30±4.76％)，實驗組的梗死面積百分比在(18±2.39％)的范圍之內，P＜0.05，有統(tǒng)計學意義。 第二部分：對照組與實驗組鈣攝取的變化鈣離子攝取通過紫外分光光度計的檢測，攝取集中表現(xiàn)在啟動反應后的60秒之內，在最初的20秒的范圍內上升最快，隨后上升的速度逐漸減慢

11、，最后到達平臺期。隨時間的變化，吸光度增加代表了SERCA攝取鈣離子增加的變化趨勢，這種趨勢用SPSS統(tǒng)計軟件進行曲線回歸，回歸后的方程和相關系數(shù)R2，對照組：y=15.589Ln(x)-3.117，R2=0.9965；實驗組：y=21.770Ln(x)-3.6841，R2=0.9949。對鈣攝取的初速度進行統(tǒng)計，其初速度V0(5.34±2.10vs.7.4±1.91，P＜0.05)。 結論： 1復方丹參注射液可以增加離體大鼠心

12、臟心輸出量和冠狀動脈流量；而對收縮壓和心率沒有明顯改觀。 2復方丹參注射液可以顯著減少離體大鼠心臟缺血再灌注后LDH的釋放，減小再灌注對心肌的損傷。 3復方丹參注射液可以明顯減小離體大鼠心臟缺血再灌注損傷后心肌的梗死面積，降低心肌的損傷程度，起到保護心肌的作用。 4復方丹參注射液可以增加SERCA攝取鈣離子的能力，減少再灌注后細胞內的鈣離子，在一定程度上減輕鈣超載，減小再灌注對離體大鼠心肌的損傷，起到保護心肌的作