Crb3影響小鼠睪丸間質(zhì)細胞分泌睪酮的研究.pdf

1、目的:檢測TM3(小鼠睪丸間質(zhì)細胞)中是否有Crb3基因的表達,如有表達,則通過轉(zhuǎn)染,使其Crb3表達上調(diào),檢測基因表達調(diào)控后睪酮分泌功能的變化。探索Crb3對睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌功能影響的相關性。為臨床中睪酮缺乏綜合征的治療提供向?qū)А?br>　　方法:
　　1、通過培養(yǎng)傳代細胞,從中提取RNA。將RNA反轉(zhuǎn)錄成C-DNA,利用普通PCR檢測Crb3在睪丸間質(zhì)細胞中的基因表達。
　　2、利用Western-Blot檢測Crb

2、3在睪丸間質(zhì)細胞中蛋白翻譯表達情況,證明Crb3在TM3中翻譯蛋白。
　　3、轉(zhuǎn)染細胞,使Crb3在TM3細胞中過表達,設置轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組、非轉(zhuǎn)染組,利用熒光定量PCR檢測Crb3基因轉(zhuǎn)錄表達改變。
　　4、同時以化學發(fā)光法檢測轉(zhuǎn)染組、空轉(zhuǎn)組、非轉(zhuǎn)染組培養(yǎng)基中睪酮的值。
　　5、統(tǒng)計學分析:利用spss19軟件系統(tǒng)建立數(shù)據(jù)庫和進行統(tǒng)計學分析,多樣板均數(shù)間比較采用方差分析,P<0.05認為差異用統(tǒng)計學意義。
　　結

3、果:
　　1、睪丸間質(zhì)細胞中Crb3的DNA的表達及其意義
　　普通PCR結果顯示:Crb3在睪丸間質(zhì)細胞中呈現(xiàn)出低表達。
　　2、睪丸間質(zhì)細胞中Crb3的蛋白質(zhì)的翻譯及其臨床意義
　　Western-blot結果顯示:Crb3在睪丸間質(zhì)細胞中,Crb3蛋白質(zhì)翻譯亦呈現(xiàn)出低表達,正好符合Crb3DNA的表達情況。
　　3、轉(zhuǎn)染實驗結果顯示:Crb3過表達轉(zhuǎn)染組與空轉(zhuǎn)組及正常未轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染組CT小于其他兩