重慶地區(qū)漢族HIV-AIDS人群分子流行病學(xué)研究.pdf

1、研究背景： 艾滋病在全球的廣泛流行已給人類帶來了嚴(yán)重的危害，由于HIV病毒的變異和耐藥毒株的不斷出現(xiàn)，且尚無有效的疫苗和藥物進(jìn)行預(yù)防和治療，因此，控制艾滋病的流行仍是全球各國面臨的重大公共衛(wèi)生問題。目前全球的艾滋病病毒感染者估計(jì)仍有3300萬人，特別是在發(fā)展中國家HIV感染者和AIDS患者的數(shù)字仍在快速增長，那里的HIV感染者和艾滋病人數(shù)占全球的90％。亞洲在2007年估計(jì)有490萬[370萬-670萬]感染者，其中包括在過去1

2、年中的新發(fā)感染者44萬[21-100萬]，大約有30萬[25-47萬]人死于艾滋病相關(guān)的疾病。重慶位于中國西南地區(qū)，是一個(gè)擁有3100萬人口的直轄市。自1993年在重慶報(bào)告了第1例HIV感染者以來，截止到2008年9月，已累計(jì)報(bào)告了5033例HIV感染者，流行的HIV-1亞型毒株以CRF07 BC為主。 HIV/AIDS相關(guān)問題研究是世界范圍的熱點(diǎn)，涉及病原體微生物理論、致病機(jī)制、傳染機(jī)制、流行病學(xué)理論、治療藥物、預(yù)防疫苗、行

3、為干預(yù)等。其中，HIV/AIDS分子流行病學(xué)是研究人群中HIV感染和AIDS趨勢(shì)的傾向性基因標(biāo)記，有利于從宏觀的角度，在基因水平探討致病機(jī)制，對(duì)人群易感性的認(rèn)識(shí)、靶向藥物和特異性疫苗的研究有重要意義。 人類白細(xì)胞抗原( Human Leukocyte Antigen，HLA)在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能，在疾病易感性和轉(zhuǎn)歸中具有重要的影響效果。已有的分子流行病學(xué)研究表明，人體的遺傳背景HLA基因多態(tài)性與HIV-1感染的易感

4、和抗性有關(guān)，并對(duì)感染后的AIDS疾病進(jìn)程產(chǎn)生不同的影響。如Carrington M和Gao X等在主要暴露于HIV-1B和C亞型的高加索人群和非洲人群中的流行病學(xué)調(diào)查，證實(shí)了HLA等位基因與HIV/AIDS具有相關(guān)性，HLA-B*27和B*57等位基因在不同的地區(qū)和種族都顯示了與緩慢的AIDS疾病進(jìn)程相關(guān)，而B*35和Cw*04等位基因卻具有對(duì)疾病進(jìn)程的促進(jìn)作用；SelvarajP等在印度南部的研究發(fā)現(xiàn)，攜帶HLA-B40和HLA-DR

5、2的個(gè)體感染HIV-1的危險(xiǎn)性增加；洪坤學(xué)等在我國四川省彝族人群中開展的HLA-A、B、Cw等位基因與HIV感染和AIDS疾病的群體遺傳流行病學(xué)調(diào)查顯示，HLA-B*46可能是HIV-1感染的易感基因，而HLA-A*3601、Cw*14和Cw*0304可能延緩AIDS的疾病進(jìn)程；李太生等在北京協(xié)和醫(yī)院的43名既往有償獻(xiàn)血漿HIV-1感染者中開展的HLA基因與疾病進(jìn)程的研究表明，攜帶HLA-Bw6純合子基因的個(gè)體AIDS的疾病進(jìn)程顯著加快

6、，而HLA-Bw4純合子基因可能對(duì)疾病進(jìn)程具有延緩作用。 在世界范圍內(nèi)，有關(guān)HLA等位基因與HIV/AIDS的關(guān)聯(lián)性研究的報(bào)道正被研究同行所關(guān)注，亞洲地區(qū)的報(bào)道屈指可數(shù)。但從現(xiàn)有研究結(jié)果看，不同地域、不同種族背景中HLA等位基因及其單倍體分布特征有其明顯的差異性，揭示在開展相關(guān)研究時(shí)要注意區(qū)域特色的分析和觀察，以利于在深入研究中有針對(duì)性進(jìn)行治療和預(yù)防問題的設(shè)計(jì)研究。 本課題以重慶市人群為對(duì)象，首次研究HLA基因標(biāo)記在HI

7、V-1感染和疾病進(jìn)程中的作用，以期為本地區(qū)HIV/AIDS治療和預(yù)防的深入研究提供科學(xué)依據(jù)。 研究方法： 1.現(xiàn)況調(diào)查：以重慶市CDC隨訪HIV/AIDS人群(769人)為對(duì)象，采用資料檢索和跟蹤調(diào)查的方法對(duì)該人群的一般分布特征進(jìn)行信息收集。 2.HIV/AIDS人群的HLA基因分布特征初步觀察：采用序列特異性引物多聚酶鏈反應(yīng)( PCR-SSP)對(duì)重慶地區(qū)漢族人群中的549名HIV/AIDS人群和2475名正常健

8、康人群(HIV-1抗體陰性)進(jìn)行兩位數(shù)HLA-I類(A、B)和HLA-II類(DRBl)等位基因的基因分型，使用Arlequin ver2.000軟件分析HLA-A，B，DRB1等位基因和單倍體的頻率和進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，使用Epi Inf02002軟件和SPSS14.0軟件觀察HIV/AIDS人群和健康人群中HLA基因的差異。 3.HLA等位基因與HIV-1感染的關(guān)聯(lián)：以759例HIV/AIDS人群為對(duì)象

9、，以358名高危行為人群為對(duì)照，采用基于Luminex流式熒光分析儀的序列特異性寡核苷酸多聚酶鏈反應(yīng)( PCR-SSO)進(jìn)行四位數(shù)HLA-I類(A、B)和HLA- II類(DRBl)等位基因的基因分型，使用Arlequin ver2.000軟件分析兩組HLA-A，B，DRB1等位基因和單倍體的頻率，使用Epi Info2002軟件和SPSS14.0軟件分析HIV/AIDS人群和HIV暴露危險(xiǎn)健康人群(HIV-1抗體陰性)中HLA相關(guān)基因

10、的差異。分析方法同方法2。 4.HLA等位基因與AIDS疾病的關(guān)聯(lián)：將HIV-1抗體陽性、CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)低于200 cells/mm3并伴隨艾滋病相關(guān)癥狀的216人定義為AIDS患者組，將HIV-1抗體陽性、CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)維持在200 cells/mm3以上并無臨床癥狀者納入HIV-1感染組。采用PCR-SSO法進(jìn)行四位數(shù)HLA-I類(A、B)和HLA- II類(DRBl)等位基因的基因分型，使用Arlequin

11、 ver2.000軟件分析兩組HLA-A，B，DRB1等位基因和單倍體的頻率，使用Epi Info2002軟件和SPSS14.0軟件分析HIV感染人群和AIDS人群HLA相關(guān)基因的差異。分析方法同方法2。 本研究的意義和創(chuàng)新點(diǎn)： 1.本研究首次獲得了重慶地區(qū)漢族HIV/AIDS人群的HLA-I類和-II類等位基因和單倍體頻率的分布特征，該人群的HLA等位基因多態(tài)性分析和HIV-1感染的易感性/抗性或疾病進(jìn)程與宿主遺傳背景

12、HLA的關(guān)聯(lián)研究對(duì)于HIV感染和致病機(jī)制的研究和HIV疫苗設(shè)計(jì)有著非常重要的意義。 2.本課題研究結(jié)果顯示重慶地區(qū)漢族人群中，B*37和B*40組成的單倍體，常見單倍體，DRB1*0403，DRB1*1101等位基因是HIV-1的易感標(biāo)記，B*3901，B*5101等位基因及組成的單倍體和Bw4-Bw6基因型是HIV-1的保護(hù)標(biāo)記；B*3501等位基因，A*2402-B*4801單倍體，常見單倍體，Bw6-Bw6、HLA-A/B