實(shí)驗(yàn)性兔肺動(dòng)脈栓塞心肌細(xì)胞凋亡調(diào)控基因的研究.pdf

1、目的：肺栓塞(Pulmonary embolism,PE)是臨床上一種常見的疾病，也是引起右心功能或全心功能不全的常見原因之一。肺動(dòng)脈高壓、肺臟氣體交換異常、低氧血癥是急性肺栓塞(Acute pulmonary embolism,APE)的主要病理生理改變。血流動(dòng)力學(xué)異常及低氧血癥導(dǎo)致的心功能障礙、心肌損傷與PE預(yù)后密切相關(guān)。目前，急性肺栓塞后心肌損傷的確切發(fā)生機(jī)制尚不十分清楚，可能與氧化應(yīng)激、Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡、線粒體損傷、自由基形成等

2、有關(guān)，而心肌缺血、缺氧、心臟負(fù)荷過(guò)重、自由基形成、鈣超載等均可誘發(fā)細(xì)胞凋亡。研究表明，缺血引起的細(xì)胞凋亡的發(fā)生誘導(dǎo)凋亡基因Bax及凋亡蛋白酶Caspase-3等的高度表達(dá)，抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-XL等表達(dá)受到抑制。本實(shí)驗(yàn)旨在探討兔APE心肌損傷模型細(xì)胞凋亡及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白活性的表達(dá)變化，研究APE時(shí)引起心肌損傷的可能機(jī)制。 方法：24只健康新西蘭白兔，體重2.5-3.5kg，雌雄不限，采用Be

3、rman球囊漂浮導(dǎo)管堵塞兔左下肺動(dòng)脈，建立兔APE模型。動(dòng)物隨機(jī)分為4組：(1)假手術(shù)組(n=6)；(2)肺動(dòng)脈栓塞0.5 h組(n=6)；(3)肺動(dòng)脈栓塞1h組(n=6)；(4)肺動(dòng)脈栓塞2 h組(n=6)；各組動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后于右心室取適量全層心肌組織，觀察心肌組織病理光鏡及電鏡下超微組織結(jié)構(gòu)的變化，免疫組化法檢測(cè)心肌細(xì)胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)的變化，流式細(xì)胞分析法測(cè)定心肌細(xì)胞凋亡率，采用SPSS 12.0版

4、統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。 結(jié)果：(1)肺栓塞后心肌組織光鏡顯示：栓塞組心肌中可見心肌細(xì)胞排列紊亂，心肌細(xì)胞核固縮，核內(nèi)染色質(zhì)增多，細(xì)胞核位于中央，染色較深，心肌細(xì)胞之間間隙增寬，可見心肌細(xì)胞腫脹；肺栓塞后心肌組織透射電鏡顯示線粒體明顯腫脹，嵴排列紊亂，部分線粒體嵴崩解，空泡變。(2)肺栓塞發(fā)生后，免疫組織化學(xué)染色顯示兔心肌組織中Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞主要在心肌細(xì)胞、部分成纖維細(xì)胞胞漿內(nèi)大量表達(dá)。與假手術(shù)相比，肺栓塞1h、2h時(shí)，兔心肌組織

5、的Bcl-2陽(yáng)性面積增高不明顯(P＜0.05)。并且栓塞1h、2h組表達(dá)稍高于栓塞0.5h組，栓塞1h組高于栓塞2h組(P＜0.05)。假手術(shù)組與栓塞0.5h組比較，無(wú)顯著性差異。(P＞0.05)。(3)肺栓塞發(fā)生后，免疫組織化學(xué)染色顯示兔心肌組織中Bax陽(yáng)性細(xì)胞主要在心肌細(xì)胞胞漿及細(xì)胞核內(nèi)大量表達(dá)。與假手術(shù)相比，肺栓塞1h、2h組，兔心肌組織的Bax陽(yáng)性面積均顯著增高(P＜0.05)。并且栓塞1h、2h組明顯高于栓塞0.5h組，栓塞2

6、h組高于栓塞1h組(P＜0.05)。(4)各組心肌組織中Bcl-2/Bax平均光密度值比值的變化在栓塞前、栓塞0.5h、栓塞1h、栓塞2h各時(shí)間點(diǎn)，Bcl-2/Bax的比值在假手術(shù)組分別為(0.945±0.068)、(0.843±0.088)、(0.5 12±0.007)、(0.35 1±0.040)，與1段手術(shù)組相比，栓塞0.5h組、栓塞1h組、栓塞2h組呈下降趨勢(shì)，有顯著性差異(0.843±0.088，0.512±0.007，O。1

7、90±0.002 vs0.945±0.068，P＜0.05)，栓塞2h組與假手術(shù)組相比，心肌組織中Bcl-2/Bax明顯降低，有顯著性差異(0.351±0.040 vs0.945±0.068，P＜0.05)，栓塞2h組與栓塞1h組相比有顯著性差異(0.351±0.040 vs 0.512±0.007，P＜0.05)，栓塞1h組與栓塞0.5h組相比有顯著性差異(0.512±0.007 vs 0.843±0.088，P＜0.05)(5)肺栓

8、塞發(fā)生后，免疫組織化學(xué)染色顯示兔心肌組織中Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞主要在心肌細(xì)胞核內(nèi)大量表達(dá)。與假手術(shù)相比，肺栓塞1h、2h時(shí)，兔心肌組織的Caspase-3陽(yáng)性面積均顯著增高（P＜0.05)。并且栓塞1h、2h組明顯高于栓塞0.5h組，栓塞2h組高于栓塞1h組(P＜0.05)。(6)各組心肌細(xì)胞凋亡率的變化：栓塞1h、2h組心肌組織細(xì)胞凋亡率分別為(18.16±0.26vs 20.39±0.049，P＜0.05)，均高于假手術(shù)組(1

9、4.16±0.49,P＜0.05)；肺動(dòng)脈阻塞后心肌細(xì)胞凋亡率明顯增加。細(xì)胞凋亡率栓塞2h組高于栓塞1h組，差異有顯著性(P＜0.05)。假手術(shù)組與栓塞0.5h組比較差異無(wú)顯著性(14.16±0.49vs 14.19±0.32，P＞0.05)。(7)將心肌組織細(xì)胞凋亡率和心肌細(xì)胞Bax、Bcl-2、Bcl-2/Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)做相關(guān)分析表明，心肌組織凋亡率與Bax和Caspase-3呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)分別為0

10、.73，0.75,P＜0.01)，與Bcl-2/Bax比值呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=0.75，P＜0.01)；與Bcl-2呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0，12，P＞0.05)。 結(jié)論：(1)心肌細(xì)胞光鏡組織病理改變及電鏡超微結(jié)構(gòu)改變說(shuō)明急性肺栓塞可以引起心肌損傷。(2)心肌組織細(xì)胞凋亡可能參與了肺栓塞心肌損傷的發(fā)生，而心肌組織細(xì)胞凋亡是引起肺栓塞早期心肌損傷的一個(gè)指標(biāo)。(3)肺栓塞可以引起心肌組織凋亡，其細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生可能Ba