RCS大鼠視網膜重構中谷氨酸變化對神經節(jié)細胞的影響研究.pdf

1、目的：
　　通過研究RCS大鼠視網膜重構過程中谷氨酸的釋放、攝取和轉化各階段的變化規(guī)律,以及谷氨酸作為神經遞質的輸出改變對視網膜節(jié)細胞功能的影響,進而揭示視網膜變性過程中谷氨酸改變對視網膜神經節(jié)細胞存活的影響,以及變性過程中視網膜神經節(jié)細胞電生理功能的改變,為視網膜變性后神經元的保護、視功能挽救和重建提供線索,為視網膜重構的基礎研究和臨床治療研究提供理論依據。
　　方法：
　　1、采用免疫組織化學技術研究重構視網膜中蛋

2、白激酶C的α亞單位(PKCα)和谷氨酰胺合成酶(GS)的分布;實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測不同時間點重構視網膜中PKCα與VGLUT-1mRNA表達量的變化規(guī)律;
　　2、Western免疫印跡技術檢測視網膜中GLAST蛋白和GS蛋白的表達水平;
　　3、膜片鉗技術檢測不同時間點視網膜神經節(jié)細胞對谷氨酸的電生理反應性,最終闡明視網膜變性過程中,視網膜神經節(jié)細胞的電生理功能的變化規(guī)律。
　　結果：

3、>　　1.RCS大鼠視網膜變性首先累及光感受器細胞,存活的視桿雙極細胞所占百分比隨變性發(fā)展逐漸增高;到視網膜變性晚期,內核層和節(jié)細胞層的細胞仍有大量殘留。
　　2.RCS大鼠視網膜變性發(fā)展到中后期,作為神經遞質的谷氨酸釋放逐漸增多,但Müller細胞攝取谷氨酸的能力并不相應地增加,只是Müller細胞內對谷氨酸的轉化能力逐漸增強;到視網膜變性晚期,谷氨酸的釋放量相對減少。
　　3.正常大鼠視網膜神經節(jié)細胞鉗制在-80mV水平

4、下受光刺激后誘發(fā)的內向電流包括三種成份,即AMPA受體成份,GABA受體成份,誘發(fā)動作電位后產生的Na+內流成份;在此鉗制電壓下,視網膜神經節(jié)細胞主要通過AMPA受體和GABA受體接受上級神經元的輸入;并且內向電流強度隨年齡增加無明顯改變,穩(wěn)定在一定水平,且谷氨酸電流強度也無明顯改變;NBQX不影響視網膜神經節(jié)細胞內向電流的各時程。
　　4.RCS大鼠視網膜中存活的對光刺激無反應的視網膜神經節(jié)細胞仍保留了部分電生理功能;在視網膜變

5、性早期,部分視網膜節(jié)細胞出現了功能障礙,光刺激信號不能通過上級神經元傳遞到視網膜神經節(jié)細胞;到視網膜變性晚期,存活的所有類型的視網膜節(jié)細胞皆接受不到上級神經元的信號輸入。
　　5.RCS大鼠視網膜變性早期時就導致ON型視網膜節(jié)細胞接受的視網膜內信息延遲、接受并處理信息的能力下降、視網膜信息輸出時間延遲,但對OFF型和ON-OFF型視網膜神經節(jié)細胞無影響。但是,隨著視網膜變性的發(fā)展,各類型節(jié)細胞視網膜內信息傳遞逐漸完全中斷,到晚期無

6、視網膜信號輸出。
　　6.RCS大鼠視網膜神經節(jié)細胞接受和處理的信息量較正常大鼠明顯減少了,且這些信息主要是由視網膜神經節(jié)細胞突觸后興奮性電流所介導的。
　　結論：
　　1.RCS大鼠視網膜變性晚期仍有大量內核層和節(jié)細胞層細胞殘留,為光感受器移植、植入視覺假體等治療方式恢復變性視網膜的視功能提供了實驗和理論基礎。
　　2.RCS大鼠視網膜變性中期游離的谷氨酸可能發(fā)生蓄積,到視網膜變性晚期神經視網膜減少了對下級神經