AngⅡ、醛固酮致心肌纖維化及Wnt1在其中的作用.pdf

1、目的：探討大鼠心肌成纖維細胞(cardiac fibroblasts, CFs)經(jīng)血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、醛固酮及其受體拮抗劑干預后CFs細胞活性的改變以及對細胞中致心肌纖維化相關(guān)基因表達的影響,同時深入研究Wnt1基因在該過程中的作用,為預防和控制心肌纖維化提供新的理論依據(jù)。
　　方法：采用膠原酶II消化法、差速貼壁法提取純化CFs,在AngⅡ、醛固酮及其受體拮抗劑作用下,應(yīng)用Cell Countin

2、g Kit-8(CCK-8)活細胞計數(shù)試劑盒檢測成纖維細胞活性,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)方法檢測細胞中靶基因及相關(guān)基因mRNA表達的變化, Western blot方法檢測細胞中靶基因及相關(guān)基因蛋白表達的變化。經(jīng)AngⅡ、醛固酮干預的心肌成纖維細胞,應(yīng)用 RNAi技術(shù)敲低 Wnt1基因表達后,分別應(yīng)用CCK-8、RT-PCR、We

3、stern blot方法檢測細胞活性、靶基因及相關(guān)基因表達的變化。
　　結(jié)果：與對照組比較,AngⅡ、醛固酮獨立干預可明顯促進 CFs細胞活性增加,AngⅡ、醛固酮聯(lián)合干預的細胞增殖活性較 AngⅡ、醛固酮單獨干預更高,且AngⅡ、醛固酮的受體拮抗劑氯沙坦、螺內(nèi)酯可顯著抑制AngⅡ、醛固酮誘導的細胞增殖效應(yīng);與對照組比較,AngⅡ、醛固酮可顯著促進心肌成纖維細胞I型膠原前膠原A1(collagen, type I, alpha1,

4、Col1a1)、III型膠原前膠原A1(collagen, type III, alpha1,Col3a1)、基質(zhì)金屬蛋白酶1(matrix metalloproteinase1,MMP1) mRNA和蛋白表達,同時抑制基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(tissue inhibitors of the factor matrix metalloproteinase1,TIMP1) mRNA和蛋白表達;和醛固酮組比較,AngⅡ組在促進心肌成纖

5、維細胞Col1a1、Col3a1、MMP1基因表達增加和TIMP1減低方面作用更強;氯沙坦、螺內(nèi)酯可顯著抑制AngⅡ、醛固酮誘導的Col1a1、Col3a1、MMP1 mRNA和蛋白表達的增加,同時升高TIMP1 mRNA和蛋白表達。經(jīng)AngⅡ、醛固酮干預的心肌成纖維細胞,利用Wnt1-siRNA敲低Wnt1基因后,細胞增殖活性明顯降低,靶基因Wnt1及膠原基因Col1a1、Col3a1表達均相應(yīng)減低。
　　結(jié)論：AngⅡ、醛固酮

6、可促進體外培養(yǎng)大鼠CFs細胞數(shù)量增殖和增加細胞內(nèi)Ⅰ、Ⅲ型膠原表達,AngⅡ、醛固酮同時干預時具有協(xié)同和疊加效應(yīng),且 AngⅡ在促進心肌膠原表達方面較醛固酮更強;而它們的拮抗劑氯沙坦、螺內(nèi)酯可抑制這些效應(yīng),其作用機制可能通過影響MMPs/TIMPs的平衡,使心臟膠原合成與分解代謝紊亂,增加CFs細胞增殖活性,促進心臟纖維化,而氯沙坦、螺內(nèi)酯可通過抑制CFs細胞增殖和膠原表達抑制心肌纖維化。體外培養(yǎng)的心肌成纖維細胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1-siRNA后