葉酸受體α特異配體PCR檢測(cè)技術(shù)在膀胱癌的應(yīng)用.pdf

1、目的：本研究旨在利用葉酸受體α作為腫瘤標(biāo)志物，通過腫瘤特異配體PCR的方法來檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞，并衡量這一方法應(yīng)用于膀胱移行細(xì)胞癌診斷的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：用免疫組化的方法檢測(cè)十例膀胱移行細(xì)胞癌組織中的葉酸受體α表達(dá)水平。同時(shí)通過酶聯(lián)免疫法檢測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌患者和健康對(duì)照組的尿液（64例膀胱癌，20例對(duì)照）和血液（20例膀胱癌，23例對(duì)照）中葉酸受體含量。再利用Western blot和qRT-PCR的方法進(jìn)一步驗(yàn)證葉酸受體α在膀

2、胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞系5637和SW-780中的表達(dá)水平。同時(shí)采集57例膀胱癌患者，48例健康對(duì)照組以及15例泌尿良性病變對(duì)照組患者3ml外周血，用基于葉酸受體α作為腫瘤標(biāo)記物的一套富集、鑒定和定量方法測(cè)定其循環(huán)腫瘤細(xì)胞水平。
　　結(jié)果：免疫組化分析和western blot分析都證實(shí)了葉酸受體α在膀胱移行細(xì)胞癌中高表達(dá)。膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞系5637和SW-780中葉酸受體αmRNA的表達(dá)水平和血液中白細(xì)胞相比分別提高了650倍和15

3、倍。ELISA檢測(cè)也驗(yàn)證了膀胱移行細(xì)胞癌組中的葉酸受體α顯著高于對(duì)照組(血清：p=0.0078；尿液：p=0.0001)?？傮w來說，膀胱移行細(xì)胞癌組中的3ml外周血CTCs水平明顯高于對(duì)照組(median:26.5 Cu/3ml VS14.0 Cu/3ml; p<0.001)。通過ROC曲線計(jì)算這一方法用于膀胱癌診斷時(shí)曲線下面積為0.819,95％ CI(0.738-0.883)。當(dāng)將閾值設(shè)為15.43 Cu/3ml時(shí)，這一方法檢測(cè)膀胱