日本血吸蟲細胞體外培養(yǎng)條件與培養(yǎng)細胞生物學特性的研究.pdf

1、目的:探討日本血吸蟲染色體制備和細胞體外培養(yǎng)條件,并分析培養(yǎng)細胞的生物學特性.方法:1.采用20 μg/ml的秋水仙素處理童蟲,制備染色體標本并進行G帶顯帶,然后對其染色體核型及G帶帶型進行分析;2.選取5種促進細胞增殖的因子,采用正交設計,配制16種條件培養(yǎng)基,對18d Sj童蟲細胞進行體外培養(yǎng),比較觀察細胞的增殖能力,直觀分析細胞AKP的檢測結果;3.用改良RPMI-1640培基對Sj尾蚴細胞進行原代和傳代培養(yǎng),用HE染色和掃描電鏡

2、觀察細胞一般形態(tài)和超微結構,用SDS-PAGE和ELISA法分析其抗原組分,用免疫熒光法和凝集試驗檢測其抗原性.結果:1.日本血吸蟲染色體2n=16,2號為性染色體,核型公式為2n=6st+8sm+2m,各對染色體均顯示出各自特征性G帶帶型;2.對組織細胞增殖相觀察和AKP(％)的直觀分析結果表明,促進細胞增殖的最佳組合為轉鐵蛋白,單核苷酸和b-FGF;3.尾蚴細胞形態(tài)觀察表明,其平均大小為3.5μM直徑,最小僅1μM直徑;HE染色后,

3、細胞呈高核質比率,少數(shù)胞漿較豐富;掃描電鏡下,有的細胞表面布滿細小微絨毛,有的呈乳突樣突起,凹窩及小孔,有的胞質形成皺折和突起;原代與傳代培養(yǎng)細胞抗原組分存在差異,其傳代細胞能與抗尾蚴血清發(fā)生特異性反應.結論:1.為血吸蟲培養(yǎng)細胞鑒定提供了染色體核型及其G帶帶型分析的方法:2.證明轉鐵蛋白,核苷酸和b-FGF對Sj童蟲細胞增殖具有明顯促進作用:3.對Sj尾蚴細胞培養(yǎng)獲得傳代結果,并初步鑒定了培養(yǎng)細胞的形態(tài)學特征,證明尾蚴傳代細胞具有免疫