尾加壓素Ⅱ通過Smad2-3誘導血管成纖維細胞遷移及膠原合成.pdf

1、目的:我們課題組前期發(fā)現(xiàn)，尾加壓素II（urotensin II, UII）能夠激活血管外膜成纖維細胞（adventitial fibroblasts，AFs）表型轉化和Smad2/3活化。本研究在前期基礎上，采用體外培養(yǎng)的AFs，進一步研究UII激活Smad2/3細胞內核轉位的受體調控機制，并論證Smad2/3在UII刺激AFs膠原合成及細胞遷移的作用，以揭示UII促進血管纖維化發(fā)展的新機制，為防止血管纖維化的進展提供新的策略和實驗依

2、據(jù)。
　　方法:在體外培養(yǎng)的SD大鼠主動脈AFs上，用UII（10-8mol/l）刺激24小時，觀察UII對Smad2/3核轉位的影響。為了探討其作用是否通過UII受體發(fā)揮作用，在研究UII作用時，提前30分加入UT阻斷劑SB710411(10-6mol/l)，共同孵育至24小時。實驗結束時，采用免疫熒光測定細胞中Smad2/3的磷酸化水平（p-Smad2/3）及核轉位；采用RNA干擾技術，分別使Smad2和Smad3基因沉默，采

3、用實時定量PCR、免疫熒光來檢測AFs中α-SMA的表達情況；采用蛋白印跡、實時定量PCR及酶聯(lián)免疫吸附實驗方法檢測前膠原I（procollagen1）的表達及I型膠原蛋白（collagen1）的分泌；采用transwell的方法檢測細胞的遷移能力。
　　結果：1.免疫熒光技術顯示UII促進AFs表達p-Smad2/3，采用10-8mol/l UII分別刺激成纖維細胞24小時后，細胞中p-Smad2/3的蛋白表達量增加，細胞核的表

4、達量增加明顯，UII刺激Smad2/3磷酸化及核轉位的效應能被UII受體阻斷劑SB710411（10-6 mol/l）所抑制；2.通過RNA干擾使Smad2和Smad3基因分別沉默，可以明顯減弱UII誘導的α-SMA基因表達，分別較 UII組降低73.26％（P<0.05）和72.29%（P<0.01）；3.通過RNA干擾使Smad2和Smad3基因分別沉默，可以減弱UII誘導的procollagen1表達，其中蛋白表達較UII組分別降

5、低54.30%（P<0.001）和47.28%（P<0.001），基因表達分別降低38.03%（P<0.01）和47.88%（P<0.01），此外，分泌到上清中的collagen1分別較UII組降低34.64%（P<0.01）和41.43%（P<0.01）；4.通過RNA干擾使Smad2和Smad3基因分別沉默，可明顯減弱UII誘導的AFs的遷移能力，Smad2和Smad3 siRNA處理組分別較UII組降低46.39%（P<0.05）