環(huán)形泰勒蟲感染細胞TLR和NLR信號通路相關分子轉錄水平的檢測與評價.pdf

1、先天性免疫是宿主抵抗病原入侵的一種重要的免疫防御機制，包括免疫細胞和先天性免疫分子。先天性免疫信號通路分子在免疫防御中發(fā)揮著重要的作用，主要包括TLR信號通路、NLR信號通路、RLR信號通路和CLR信號通路。TLR信號通路主要識別細胞外的原蟲、病毒和細菌等病原，在抵抗病原入侵中發(fā)揮著重要作用。NLR信號通路主要識別胞內抗原，通過調控細胞因子的釋放起到免疫防御作用。環(huán)形泰勒蟲可侵入淋巴樣細胞和紅細胞的原蟲，其裂殖體階段具有轉化宿主細胞的特

2、性，業(yè)已證明主要寄生于B淋巴細胞、樹突狀細胞和巨噬細胞等免疫相關細胞。因此，研究環(huán)形泰勒蟲裂殖體感染細胞TLR和NLR信號通路相關分子轉錄水平，不僅可以揭示環(huán)形泰勒蟲對宿主細胞天然免疫功能的影響，而且對深入開展寄生蟲致病、寄生蟲誘導宿主細胞發(fā)生永生化等病原與宿主相互作用機制研究具有重要意義。本研究的主要結果如下:
　　1.Real-time PCR檢測方法的建立:根據GenBank上發(fā)表的序列，針對牛的Toll樣受體(TLR1-1

3、0)、NOD1、NOD2和IL6等分子設計了特異性引物，建立了48種Real-time PCR檢測方法。實驗結果顯示:所建方法熔解曲線峰單一，在不同目標分子之間無交叉反應，特異性好;可檢測1-100 copies/μL以上的重組質粒，敏感性好;組內重復變異系數低于3.52％，組間重復變異系數不超過3.92％。為進一步開展牛Toll樣信號通路和NOD樣受體信號通路相關分子的轉錄水平研究提供了技術和方法。
　　2.環(huán)形泰勒蟲感染細胞T

4、oll樣受體和NOD樣受體信號通路相關分子轉錄水平的檢測與評價:采用所建立的Real-time PCR檢測方法，以健康牛外周血淋巴細胞為對照組，對環(huán)形泰勒蟲感染的TaXJ-1、TaNM和TaX J-23株淋巴細胞系的F10代次細胞的Toll樣受體和NOD樣受體信號通路上的48個分子的轉錄水平進行了檢測。結果顯示:TLR1-TLR10轉錄水平下調，差異極顯著(P＜0.01)，其中TLR1、TLR5、TLR7和TLR10與其他受體相比下調十

5、分明顯; NOD1、NOD2、NAIP、NLRP1和NLRC4分子轉錄水平下調，差異極顯著(P＜0.01)，NLRP3轉錄水平下調，差異顯著(P＜0.05)，其中NAIP與其他受體相比下調十分明顯，而NLRP1在實驗組中很難檢測到;Toll樣和NOD樣受體信號通路下游接頭分子，細胞因子中僅IL6和IL1β轉錄上調，差異極顯著(P＜0.01)，且IL6上調倍數比IL1β大，其余30個分子轉錄水平下調，差異極顯著(P＜0.01)，其中ASC