索拉非尼聯(lián)合吉西他濱不同序貫用藥對(duì)非小細(xì)胞肺癌的協(xié)同作用.pdf

1、索拉非尼是一種高選擇性小分子多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑,目前有多項(xiàng)研究表明索拉非尼對(duì)各類腫瘤細(xì)胞具有潛在的抗增殖作用,其中包括非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。本研究通過體外實(shí)驗(yàn)探討了索拉非尼單藥的抗增殖效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制,以及通過不同序貫聯(lián)合的方式將索拉非尼與化療藥物吉西他濱聯(lián)合作用于表皮生長(zhǎng)因子酪氨酸酶抑制劑(EGFR-TKI)敏感以及耐藥的NSCLC細(xì)胞株P(guān)C9和A549細(xì)胞,探討各種序貫方式產(chǎn)生的不同抗增殖效應(yīng),并闡述相關(guān)機(jī)制。
　　將

2、A549和PC9細(xì)胞株進(jìn)行一段時(shí)間的細(xì)胞培養(yǎng)。MTT法檢測(cè)不同濃度的索拉非尼或吉西他濱對(duì)兩種細(xì)胞株的增殖抑制作用,分別做出兩種單藥的量效曲線圖,并計(jì)算出兩藥對(duì)A549及PC9細(xì)胞株的半數(shù)抑制率(IC50值)。然后將不同倍數(shù)的索拉非尼和吉西他濱的IC50濃度,不同序貫方式的聯(lián)合作用于兩種細(xì)胞,分別檢測(cè)其抑制率,并計(jì)算出聯(lián)合指數(shù)。流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)單藥索拉非尼和吉西他濱對(duì)兩種細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響,以及兩藥不同序貫作用方式對(duì)細(xì)胞周期的影響。蛋

3、白質(zhì)印跡法檢測(cè)索拉非尼和吉西他濱單藥以及不同序貫聯(lián)合作用方式下對(duì)細(xì)胞中p-PDGFR、p-AKT,p-ERK及Bcl-2表達(dá)的影響。
　　我們發(fā)現(xiàn)吉西他濱和索拉非尼單藥對(duì)A549和PC9細(xì)胞株具有增殖抑制作用,且有濃度依賴性,索拉非尼和吉西他濱作用于A549細(xì)胞72h的IC50值分別為5.91±0.22μmol/L和10.38±0.80nmol/L;作用于PC9細(xì)胞72h的IC50值,分別是6.13±0.14μmol/L和8.38

4、±0.64nmol/L。在序貫聯(lián)合作用方式中,先給予吉西他濱后給予索拉非尼的序貫方式產(chǎn)生了明顯的協(xié)同效應(yīng),而先給予索拉非尼后給予吉西他濱的作用方式產(chǎn)生了藥效的拮抗作用。細(xì)胞周期分析顯示索拉非尼將A549和PC9細(xì)胞阻滯于G0/G1期;而吉西他濱將A549和PC9細(xì)胞阻滯于S期;先給予吉西他濱后給予索拉非尼的序貫方式使得G0/G1期細(xì)胞比例降低;而先給予索拉非尼后給予吉西他濱的序貫方式使得S期細(xì)胞減少;可見不同序貫作用方式時(shí),兩藥對(duì)細(xì)胞周

5、期的影響產(chǎn)生了相互干擾或疊加的作用。在檢測(cè)蛋白表達(dá)過程中,我們發(fā)現(xiàn)吉西他濱能上調(diào)p-AKT,p-ERK及Bcl-2的表達(dá),而索拉非尼可以明顯抑制p-AKT,p-ERK及Bcl-2表達(dá);先吉西他濱后索拉非尼的序貫作用方式可以使原先被吉西他濱激活的p-AKT,p-ERK及Bcl-2被隨后的索拉非尼所抑制,所以產(chǎn)生了協(xié)同抗增殖作用;而先索拉非尼后吉西他濱的序貫作用方式使得先被索拉非尼抑制的信號(hào)分子再次被隨后的吉西他濱所激活,從而產(chǎn)生了藥效的拮