新型肽類生長調節(jié)物質——植物磺肽素PSK的研究.pdf

1、植物磺肽素(phytosulfokine，簡寫PSK)是近年來發(fā)現的一種新型植物肽類生長調節(jié)物質。它是兩種短肽類物質--磺化的四肽(PSK-β)或五肽(PSK-α)，其結構為[H-Tyr(SO3H)-Ile-Tyr(SO3H)-Thr-OH]或[H-Tyr(SO3H)-Ile-Tyr(SO3H)-Thr-Gln-OH]。1996年，日本學者Matsubyashi等從石刁柏培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)液條件化培養(yǎng)基(conditionedmedium，

2、CM)中發(fā)現了PSK，它可以促進細胞的生長和增殖。目前，PSK的研究僅限于日本學者Matsubayashi的一家實驗室，作為一個新的植物生長調節(jié)物質，亟待進行深入和廣泛的研究。本研究從PSK的化學合成、生理效應、生物分析等方面進行了初步研究。主要內容如下： 1.利用磺化反應將五肽Tyr-Ile-Tyr-Thr-Gln進行磺化，通過柱層析將其磺化產物進行分離，再利用薄板層析(TLC)法進一步純化。經質譜鑒定，PSK-α合成成功。

3、 2.在起始密度較低(3.6×104個·ml-1)的BY-2懸浮細胞培養(yǎng)體系下，即使在培養(yǎng)基中添加適量的生長素和細胞分裂素，細胞也不能正常生長和分裂。將不同濃度的CM添加到低密度的BY-2懸浮細胞液中，CM可以促進低密度下BY-2細胞的增殖。分析表明：CM中確實存在著促有絲分裂活性的信號分子。 3.我們用化學合成的不同濃度的PSK-α添加到BY-2細胞的低密度培養(yǎng)體系中，來驗證PSK-α的生理效應。測定結果顯示：在低密度培

4、養(yǎng)體系中，化學合成的PSK-α促有絲分裂活性與CM中信號分子的促有絲分裂活性的趨勢相一致，這說明CM中存在的促進細胞增殖的信號分子就是PSK-α。細胞的OD600在一定范圍濃度內隨著PSK-α濃度的增大而增加，在0.25nmol·L-1～5.0nmol·L-1PSK-α濃度范圍內，OD600和PSK-α濃度呈直線關系。因此該反應系統(tǒng)可以用來作為PSK-α的生物分析系統(tǒng)。 4.通過層析純化和質譜(MS)鑒定首次從小麥愈傷組織、未受