GFAP及hTERT雙啟動了靶向性表達hTIS基因引導放射性碘治療膠質瘤.pdf

1、研究目的: 放射性碘治療甲狀腺癌是臨床常用方法。非甲狀腺來源腫瘤通過轉染hNIS基因也能攝取碘，端粒酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)和神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）啟動子都是腫瘤特異性啟動子，對于靶向性治療膠質瘤有潛在的研究價值。
　　 方法: 先擴增GFAP、hTERT啟動子等基因，并保存于相應質粒中

2、。并測定各啟動子的啟動效率，然后構建了hTERT啟動子引導腺病毒早起蛋白(early region1A，E1A)基因同時GFAP啟動子引導鈉碘轉運體(human sodium iodidesymporter，hNIS)基因的條件復制腺病毒。膠質瘤細胞被腺病毒轉染后，利用病毒空斑形成實驗檢測條件復制腺病毒的復制能力。進行Western blots實驗，125I內流及外流實驗并進行131I細胞克隆實驗，來評估細胞攝碘情況。最后，在細胞實驗的

3、基礎上，構建膠質瘤荷瘤裸鼠模型，進行動物體內放射性碘治療實驗。
　　 結果: 成功擴增了相應基因并保存。實驗證明GFAP啟動子啟動效率能達到SV40啟動子的60％左右，hTERT啟動子啟動效率能達到SV40啟動子的43％左右。成功構建了條件復制腺病毒Ad-Tp-E1A-Gp-NIS，并感染膠質瘤細胞。Westernblot實驗顯示43、70、49、120、70、110kDa的條帶，分別對應著β-acting、GFAP、hTERT

4、、hNIS和hTPO蛋白。病毒復制實驗證明了Ad-Tp-E1A-Gp-NIS的有效性，hTERT啟動子能成功的限制腺病毒在腫瘤細胞內的復制。攝125I實驗證明GFAP啟動子能成功引導hNIS基因表達并攝取碘。細胞克隆實驗中顯示感染Ad-Tp-E1A-Gp-NIS后腫瘤細胞能成功的被131I殺死。成功構建了U87荷瘤裸鼠模型了，感染Ad-Tp-E1A-Gp-NIS并進行放射性碘治療后裸鼠生存周期延長，腫瘤生長被抑制，核素顯像顯示荷瘤裸鼠腫