KGF在成纖維細(xì)胞促進(jìn)表皮細(xì)胞增殖作用中的研究.pdf

1、目的：日常生活中，大面積深度燒傷、糖尿病、創(chuàng)傷等因素常造成正常皮膚結(jié)構(gòu)完整性及生理功能的破壞。如何有效的修復(fù)創(chuàng)面、重建皮膚正常組織結(jié)構(gòu)恢復(fù)皮膚正常生理功能，成為目前實驗研究以及臨床治療的難點。皮膚損傷的修復(fù)是一個非常復(fù)雜的過程，由多種生長因子及細(xì)胞因子介導(dǎo)，其中角質(zhì)細(xì)胞生長因子(KGF)發(fā)揮了重要的作用。角質(zhì)細(xì)胞生長因子為成纖維細(xì)胞生長因子家族的一員，它通過與受體(KGFR)結(jié)合發(fā)揮作用，是一種促上皮細(xì)胞增殖的生長因子，與創(chuàng)面愈合息息相

2、關(guān)，還與免疫重建、器官發(fā)育、腫瘤發(fā)生等多方面關(guān)系密切。該因子由間質(zhì)細(xì)胞分泌，其表達(dá)受IL-1、血小板衍生生長因子BB、轉(zhuǎn)化生長因子、腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子的正調(diào)控作用影響，通過間充質(zhì)-上皮相互作用方式，對多種組織器官，包括肺、皮膚、呼吸道、頭發(fā)毛囊、胃腸道、膀胱等的上皮損傷的修復(fù)發(fā)揮重要作用，但是KGF的生物學(xué)性質(zhì)尚未完全了解。本實驗旨在研究成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的角質(zhì)細(xì)胞生長因子(KGF)對表皮細(xì)胞增殖的影響。
　　 方法：取16-3

3、0歲患者手術(shù)切除的包皮修剪至全厚皮片，外分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞和表皮細(xì)胞，取第二代的成纖維細(xì)胞提取總RNA采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測人皮膚成纖維細(xì)胞中KGF基因的轉(zhuǎn)錄水平，對第2代的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)48h后，收集細(xì)胞培養(yǎng)液用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測培養(yǎng)液中KGF的濃度，之后對第2代表皮細(xì)胞進(jìn)行傳代，分別用K-SFM(不含KGF)，K-SFM(含1ng/mL的KGF)，DMEM(含10％的FBS)和成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液培

4、養(yǎng)24h、36h、48h、60h、72h，用細(xì)胞計數(shù)法、MTT法和免疫熒光的方法檢測各實驗組培養(yǎng)液對表皮細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。最后對所得數(shù)據(jù)經(jīng)行統(tǒng)計學(xué)處理。
　　 結(jié)果： RT-PCR結(jié)果顯示，可擴(kuò)增獲得KGF，說明人皮膚成纖維細(xì)胞中KGF轉(zhuǎn)錄水平顯著，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)可檢測到人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中存在較高水平的KGF，細(xì)胞計數(shù)結(jié)果和MTT結(jié)果表明，添加KGF的K-SFM和成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液均能夠促進(jìn)表皮細(xì)胞增殖，亦可

5、保持表皮細(xì)胞的活性，并用免疫熒光檢測方法得出，人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中的KGF能夠與表皮細(xì)胞表面的KGF特異性受體相結(jié)合。
　　 結(jié)論：本實驗得出體外分離培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞中KGF轉(zhuǎn)錄水平顯著，成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中較其他對照組能夠檢測到高濃度的KGF，且各組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，說明成纖維細(xì)胞能夠合成和釋放KGF，且可與表皮細(xì)胞表面的KGF特異性受體相結(jié)合而發(fā)揮其特異性作用，成為其促進(jìn)表皮細(xì)胞增殖的重要因素，從而