NBEAL1基因與蛋白功能的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：構(gòu)建新基因Neurobeachin Like 1(NBEAL1)的表達載體,表達純化重組蛋白并鑒定其生物活性,制備單克隆抗體并檢測NBEAL1蛋白在不同惡性程度腦膠質(zhì)瘤中的表達情況。方法：通過先提取正常人腦組織的總RNA,反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,篩選合適的片段構(gòu)建pGEX-KG/NBEAL1表達載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導表達,GST蛋白親和純化,Western Blotting鑒定純化產(chǎn)物的純度和特異性,制備單

2、克隆抗體,并用所制備的抗體研究該蛋白在腫瘤惡性程度變化中的作用。結(jié)果： NBEAL1基因片段被克隆入pGEX-KG表達載體,測序證實克隆片段序列正確,NBEAL1融合蛋白在包涵體中表達,表達量占菌體總蛋白的30%以上,純化的重組蛋白純度達95%以上。Western Blotting證明所純化的蛋白含有GST標簽與NBEAL1肽段。2株單克隆抗體被成功制備。該蛋白在正常腦組織中表達較低,而在低級別的腦膠質(zhì)瘤組織中表達明顯上調(diào),并且惡性程度

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