乳腺癌的分子分型及Nek2B在乳腺中表達及作用的研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學博士學位論文乳腺癌的分子分型及Nek2B在乳腺中表達及作用的研究姓名：王亞紅申請學位級別：博士專業(yè)：臨床醫(yī)學；腫瘤學指導教師：牛昀201205天津醫(yī)科大學博士學位論文第二部分目的檢測乳腺癌發(fā)生發(fā)展模型MCFl0細胞系中Nek2B的表達情況；觀察重組Nek2B質(zhì)粒在癌變前細胞系中的作用以及Nek2BsiRNA對癌細胞系的影響；觀察Nek2BsiRNA在裸鼠成瘤模型中的應用以及Nek2BmRNA在接受含紫杉醇的新輔助化療患者中的

2、表達。方法以國內(nèi)外相關(guān)研究為依據(jù)，用MCFl0A、MCFlOAT、MCFl0DCIScom和MCFl0CAl四個細胞系建立乳腺癌發(fā)生發(fā)展模型。westernblot技術(shù)檢測四種細胞中Nek2蛋白的表達水平，應用細胞轉(zhuǎn)染方法將重組Nek2B質(zhì)粒與siIⅢA轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)，采用PCR技術(shù)檢測細胞中Nek2B的表達情況，流式細胞術(shù)、免疫熒光雙染色技術(shù)、克隆形成實驗、MTT實驗檢測轉(zhuǎn)染前后細胞的不同變化。利用MCFl0CAl細胞建立裸鼠成瘤模型，觀

3、察Nek2BsiRNA以及化療藥物紫杉醇對裸鼠體內(nèi)腫瘤生長的影響。觀察接受含紫杉醇的新輔助化療患者術(shù)后瘤體內(nèi)Nek2BmRNA的表達情況與患者對化療反應的關(guān)系以及與患者臨床病理學特征的關(guān)系。結(jié)果1Nek2及Nek2B在癌前細胞系MCFl0A、MCFlOAT中低表達，在癌細胞系MCFl0DCIScorn、MCFl0CAI中高表達。2在癌前細胞系中轉(zhuǎn)染重組Nek2B質(zhì)粒DNA結(jié)果顯示，與對照組細胞相比，轉(zhuǎn)染組細胞中心體表達情況與細胞周期變化

4、不明顯(尸005)。在癌細胞系中轉(zhuǎn)染Nek2BsiRNA結(jié)果顯示，與對照組細胞相比，MCFl0DCIScom轉(zhuǎn)染組細胞中出現(xiàn)大量多核細胞(尸O05)，MCFl0CAl細胞轉(zhuǎn)染組細胞增殖能力減弱，且經(jīng)不同濃度紫杉醇處理24h后，轉(zhuǎn)染組細胞死亡數(shù)高于對照組(P005)。3Nek2BsiRNA處理組的裸鼠腫瘤生長均較PBS組與對照siRNA組減慢(尸005)，紫杉醇聯(lián)合Nek2BsiRNA處理組裸鼠體內(nèi)腫瘤生長較單獨應用Nek2BsiRNA組