HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑篩選方法的研究.pdf

1、逆轉(zhuǎn)錄酶在人類免疫缺陷病毒(HIV)的生命周期中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，成為目前最成功的獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的治療靶點之一，逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑在AIDS治療中必不可少?，F(xiàn)有藥物的副作用和耐藥性的快速出現(xiàn)使得尋找新HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的研究工作更為緊迫。天然產(chǎn)物是新藥的重要來源，如能對天然產(chǎn)物粗提物進行HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性篩選將極大地提高發(fā)現(xiàn)新HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的效率。因此，本文以發(fā)展可用于天然產(chǎn)物粗提物的HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的

2、篩選方法為目標進行了研究。 首先，創(chuàng)新性地將異相免疫分析、時間分辨熒光檢測與HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶催化的逆轉(zhuǎn)錄反應相結(jié)合，構(gòu)建了新的HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶活性檢測方法。這一方法借助digoxigenin和抗digoxigenin抗體進行捕獲，可以有效避免天然產(chǎn)物粗提物中內(nèi)源性生物素帶來的干擾；檢測中使用的異相時間分辨熒光技術(shù)可以有效避免天然產(chǎn)物粗提物自身對檢測準確性帶來的干擾。實驗證實了其可行性。 其次，對一些重要的影響因素進行

3、優(yōu)化，并對優(yōu)化后的方法進行了評價。研究表明，新方法簡便、快速，可以準確定量檢測HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶活性，靈敏度高，重復性好，證實所開發(fā)的方法能有效避免天然產(chǎn)物粗提物中內(nèi)源性生物素帶來的干擾，準確檢測純物質(zhì)和天然產(chǎn)物粗提物的HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性，而且可用于分離提取時的活性跟蹤。 最后，將該方法用于海綿天然產(chǎn)物的研究。結(jié)果表明，該方法可以評估海洋生物粗提物的HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性，可以用于分離前后的活性跟蹤，并進而指導下一步