萼花臂尾輪蟲Dmrt基因DM區(qū)的克隆.pdf

1、本文研究了溫度與培養(yǎng)基對(duì)蒜頭藻生長(zhǎng)的影響，并用不同種類的藻類和不同濃度的蒜頭藻對(duì)萼花臂尾輪蟲進(jìn)行培養(yǎng)，觀察了其生長(zhǎng)情況，還對(duì)忽然改變食物種類對(duì)輪蟲有性生殖的誘導(dǎo)進(jìn)行了探索；為了探索輪蟲的性別決定機(jī)制，提取了萼花臂尾輪蟲非混交雌體的基因組DNA，擴(kuò)增了其Dmrt基因的DM結(jié)構(gòu)域。主要研究結(jié)果如下： (1)蒜頭藻在27±1℃下、BG-11培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最好，25天后最高密度可達(dá)1.307xlO<'8>ind／ml，相對(duì)生長(zhǎng)常數(shù)為0.0

2、89。蒜頭藻直接在f／2培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況不理想，而通過海水馴化的蒜頭藻在f／2培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，27±1℃下經(jīng)15天培養(yǎng)密度可達(dá)3.05×10<'7>ind／m1。 (2)萼花臂尾輪蟲在藻細(xì)胞數(shù)為1.0×10<'8>／ml的蒜頭藻中生長(zhǎng)情況最好。蒜頭藻→酵母、酵母→蒜頭藻的食物忽然改變均能誘導(dǎo)輪蟲出現(xiàn)有性生殖。但是蒜頭藻→酵母的誘導(dǎo)效果更明顯。 (3)用酚／氯仿法成功的提取了輪蟲的基因組DNA。用簡(jiǎn)并PCR法擴(kuò)增并克隆了

3、輪蟲的Dmrt基因的DM結(jié)構(gòu)域，用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)．單鏈構(gòu)象多態(tài)(Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP)技術(shù)對(duì)20個(gè)克隆進(jìn)行了分析，獲得了3條Dmrt序列，分別測(cè)序，測(cè)序結(jié)果均為140bp。推測(cè)其編碼氨基酸的序列，可見兩條氨基酸序列完全相同，與另一條差別較大。氨基酸序列經(jīng)GenBank中同源性檢索，相同的兩條序列與果蠅的dsx基