GDF-5在軟骨細胞再分化中的作用及機制研究.pdf

1、目的:觀察體外傳代過程中C57小鼠關節(jié)軟骨細胞去分化現(xiàn)象，GDF5作用于已去分化的軟骨細胞，使其再分化。兔軟骨細胞三維培養(yǎng)，GDF5誘導后修復兔膝關節(jié)缺損，行檢測進一步證明GDF5的作用。初步研究MiRNA-145在軟骨再分化中的作用機制。
　　方法:新生C57小鼠膝關節(jié)分離獲取原代軟骨細胞傳代至P7代，對P1、P4代和GDF5誘導的P4代細胞從形態(tài)、增殖、基質分泌以及基因和蛋白表達等方面采用顯微鏡觀察，CCK-8增殖曲線測定、細

2、胞阿利辛藍染色、qRT-PCR及Western Blot進行比較。將不同實驗組的兔軟骨細胞與PLGA/CHI絡合物支架結合7天后修復兔膝關節(jié)缺損，三月后取材，行HE、阿利辛藍、Col2免疫組化染色等檢測。將MiRNA-145的模擬劑和抑制劑轉染入細胞，檢測胞內(nèi)SOX9水平。
　　結果:C57小鼠及兔關節(jié)軟骨細胞傳代過程中形態(tài)發(fā)生變化;P4代細胞增殖能力較P1代稍減弱，P7代無明顯增殖;P1代胞外基質分泌量高于P4代，而P4代經(jīng)GD

3、F5誘導7天后表達量有所上升;P4代細胞相關特性分子(SOX9、ColⅡ和Aggrecan等)mRNA及蛋白表達水平較P1代下調，經(jīng)GDF5誘導后表達水平回升; PLGA/CHI支架的細胞毒性低且細胞可均勻分布材料各層。P4細胞/材料GDF5誘導組修復缺損效果介于P1細胞/材料組和P4細胞/材料組之間;抑制MiRNA-145可增強SOX9的表達，反之亦然。
　　結論:體外培養(yǎng)的P4代軟骨細胞出現(xiàn)較明顯的去分化現(xiàn)象，經(jīng)一定濃度(30