VEGFC信號通路參與Maspin調控絨毛外滋養(yǎng)細胞侵襲的研究.pdf

1、第一部分缺氧對絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC表達的影響
　　目的：研究二氯化鈷（CoCl2）缺氧條件下絨毛外滋養(yǎng)細胞 VEGFC表達情況，探討缺氧對絨毛外滋養(yǎng)細胞VEGFC表達的影響，并分析VEGFC與Maspin表達間的相關性。
　　方法：
　　1.采用二氯化鈷（CoCl2）構建人早孕絨毛外滋養(yǎng)細胞株（TEV-1）化學缺氧模型。2.采用熒光定量 PCR法及 Western Blot法分別檢測絨毛外滋養(yǎng)細胞株 VEGFC

2、mRNA及蛋白的表達情況。
　　結果：
　　1.熒光定量PCR結果顯示缺氧24小時，絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC mRNA表達明顯升高，是正常對照組的2.7倍，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　2.Western Blot結果顯示缺氧24小時，絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC蛋白量明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：缺氧可以使絨毛外滋養(yǎng)細胞株中Maspin表達明顯增高，同時VEGFC的表達也相應升高，兩者之間的變化趨勢

3、基本一致。因此推測 VEGFC可能參與了maspin對絨毛外滋養(yǎng)細胞的調控。
　　第二部分重組人Maspin蛋白對絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC表達的影響
　　目的：研究常氧及缺氧時重組人Maspin蛋白對絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC表達的影響，探討Maspin蛋白對絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC表達的調節(jié)機制。
　　方法：
　　1.采用二氯化鈷（CoCl2）構建絨毛外滋養(yǎng)細胞株化學缺氧模型。
　　2.常氧及缺氧條件

4、下，利用不同濃度重組人Maspin蛋白干預絨毛外滋養(yǎng)細胞。
　　3.采用熒光定量 PCR法 Western Blot法分別檢測絨毛外滋養(yǎng)細胞株 VEGFC mRNA及蛋白的表達情況。
　　結果：
　　1.在常氧條件下，重組人Maspin蛋白干預24小時以后，隨著蛋白濃度的增加絨毛外滋養(yǎng)細胞株 VEGFC表達明顯升高，干預48小時以后絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC的表達未見明顯變化。
　　2.在缺氧條件下，重組人Mas

5、pin蛋白干預24小時后隨著蛋白濃度的升高絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC的表達量反而逐漸降低，在48小時以后VEGFC的表達明顯降低。
　　結論：在常氧條件下重組人Maspin蛋白上調絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC的表達，在缺氧條件下重組人Maspin蛋白下調絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC的表達。
　　第三部分脫甲基化藥物對絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC表達的影響
　　目的：研究脫甲基化藥物在常氧及缺氧條件下對絨毛外滋養(yǎng)細胞株 VEG

6、FC表達的影響，探討脫甲基化藥物對絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC表達的調節(jié)機制。
　　方法：
　　1.采用二氯化鈷（CoCl2）構建絨毛外滋養(yǎng)細胞株化學缺氧模型。
　　2.在常氧及缺氧條件下，利用不同濃度的脫甲基化藥物干預絨毛外滋養(yǎng)細胞株。
　　3.采用熒光定量 PCR法及 Western Blot法分別檢測絨毛外滋養(yǎng)細胞株 VEGFC mRNA及蛋白的表達情況。
　　結果：
　　1.在常氧條件下脫甲基化

7、藥物干預24小時和48小時后，絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC的表達量隨著脫甲基化藥物濃度的增加，出現(xiàn)先升高后降低的變化，峰值分別是正常對照的5.6倍和2.6倍，都是在藥物濃度為1.0μmol/L時出現(xiàn)。2.在缺氧條件下脫甲基化藥物干預24小時和48小時后，絨毛外滋養(yǎng)細胞株VEGFC的表達量變化隨著脫甲基化藥物濃度的增加，出現(xiàn)先升高后降低的變化，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　結論：脫甲基化藥物5-氮雜-2′-脫氧胞苷可以使絨毛外滋養(yǎng)細胞株

8、VEGFC的表達增加，這一效應是呈劑量依賴性的。而缺氧可以抑制5-氮雜-2′-脫氧胞苷對VEGFC表達的促進作用。
　　第四部分重組人VEGFC蛋白對絨毛外滋養(yǎng)細胞株遷移與侵襲能力的影響
　　目的：研究常氧及缺氧條件下重組人VEGFC蛋白干預后的絨毛外滋養(yǎng)細胞株遷移與侵襲能力變化，探討重組人VEGFC蛋白對絨毛外滋養(yǎng)細胞株遷移與侵襲的調節(jié)機制。
　　方法：
　　1.采用二氯化鈷（CoCl2）構建絨毛外滋養(yǎng)細胞株化

9、學缺氧模型。
　　2.在常氧及缺氧條件下，利用不同濃度的重組人VEGFC蛋白干預絨毛外滋養(yǎng)細胞株。
　　3.利用Transwell細胞遷移與侵襲實驗檢測絨毛外滋養(yǎng)細胞株遷移與侵襲能力的變化。
　　結果：
　　1.在常氧條件下隨著重組人VEGFC蛋白濃度升高絨毛外滋養(yǎng)細胞株的遷移與侵襲能力逐漸增加。
　　2.在缺氧條件下隨著重組人VEGFC蛋白濃度升高絨毛外滋養(yǎng)細胞株的侵襲能力逐漸降低，而遷移能力無明顯改變。