孤獨(dú)癥腸道菌群結(jié)構(gòu)及病因?qū)W的初步研究.pdf

1、孤獨(dú)癥(autism spectrum disorders，ASD)是兒童廣泛性發(fā)育障礙中最為典型最為常見(jiàn)的一種疾病，以語(yǔ)言障礙、交流障礙、刻板興趣和行為為特征。一般在3歲前發(fā)病，該病的患病率較高，而且近年呈明顯的上升趨勢(shì)。孤獨(dú)癥給患者和家庭造成巨大的痛苦，也帶來(lái)沉重的社會(huì)負(fù)擔(dān)。孤獨(dú)癥是一類多因素疾病，如遺傳因素、神經(jīng)生化因素、免疫學(xué)因素、孕產(chǎn)期因素等。近年來(lái)隨著對(duì)腸道微生物生態(tài)學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)與多種慢性病及精神疾病

2、密切相關(guān)。孤獨(dú)癥作為一種精神疾病，多數(shù)患者具有多種腸胃問(wèn)題，如偏食、消化不良，吸收不好，便秘，腹瀉，有時(shí)交替出現(xiàn)，打嗝，大便異味，異常的腸漏，以及腸內(nèi)病菌過(guò)度生長(zhǎng)(真菌，細(xì)菌和病毒)等。為了探明孤獨(dú)癥與腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)的相關(guān)性，本研究采用DGGE及SOLiD高通量測(cè)序技術(shù)等分子生物學(xué)手段對(duì)孤獨(dú)癥患者及健康對(duì)照者腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較，以期尋找孤獨(dú)癥新的病因，為孤獨(dú)癥的研究與治療提供生物學(xué)依據(jù)。另外，該項(xiàng)研究還通過(guò)腸道代謝物對(duì)大鼠進(jìn)

3、行腹腔注射，初步了解孤獨(dú)癥發(fā)生與腸胃問(wèn)題的因果關(guān)系。
　　 在該項(xiàng)研究中，我們收集了45份2到9歲孤獨(dú)癥患者糞便樣本(包括7個(gè)孤獨(dú)癥家庭)和20份健康兒童對(duì)照糞便樣本，抽提樣本細(xì)菌總基因組DNA。首先采用了DGGE技術(shù)對(duì)所有樣本進(jìn)行了分析，然后挑選了6例孤獨(dú)癥和2例正常樣本進(jìn)行高通量SOLiD測(cè)序分析。同時(shí)，我們還提取了健康兒童糞便代謝產(chǎn)物，腹腔注射SD大鼠，進(jìn)行腸道代謝產(chǎn)物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)；大鼠行為學(xué)測(cè)試采用高架十字迷宮(EPM)，

4、腦組織神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-HT)和多巴胺(DA)采用高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)。
　　 該項(xiàng)研究DGGE結(jié)果顯示孤獨(dú)癥組與正常組差異顯著，而孤獨(dú)癥組內(nèi)菌群分布相似性較高。差異條切膠并克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn)，孤獨(dú)癥患者腸道中大腸桿菌與志賀菌(Escherichia/Shigella)含量相對(duì)較高，而正常對(duì)照中桿菌屬細(xì)菌(Bacteroides)含量較高。SOLiD測(cè)序結(jié)果顯示，孤獨(dú)癥患者樣本特有的細(xì)菌為Bifidobacterium

5、，Paenibacillus，Pseudomonas。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)孤獨(dú)癥樣本含量較高的細(xì)菌種類多數(shù)為致病菌(Bifidobacterium除外)，能夠產(chǎn)生毒素。由此來(lái)看，孤獨(dú)癥與腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)有一定相關(guān)性。腸道代謝產(chǎn)物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，實(shí)驗(yàn)組大鼠無(wú)焦慮癥狀，同時(shí)針對(duì)實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬等腦區(qū)5-HT和DA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組大鼠分泌量顯著降低。這些結(jié)果提示，腸道代謝物對(duì)腦功能有著重要的影響，由此，可以推測(cè)孤獨(dú)癥腸漏對(duì)于加重孤獨(dú)癥病情有一定影響