海洛因通過Ca2+相關信號通路調節(jié)海馬星形膠質細胞中Calpain-1活性.pdf

1、目的：觀察海洛因成癮大鼠海馬組織和海馬體外培養(yǎng)的海馬神經膠質細胞中Calpain-1的表達，同時觀察海洛因對海馬星形膠質細胞線粒體中鈣離子及AMPKα1的影響，探討Calpain-1在海洛因成癮中的中樞機制。
　　方法：建立海洛因成癮大鼠模型，隨機分為生理鹽水組（對照組）和海洛因依賴組（成癮組），Western blot檢測大鼠海馬組織中Calpain-1的表達水平;SD大鼠海馬原代細胞培養(yǎng)。Western blot和細胞免疫熒光

2、組織化學鑒定分離與培養(yǎng)星形膠質細胞;海洛因處理體外分離培養(yǎng)的大鼠海馬星形膠質細胞，Western blot檢測細胞中Calpain-1、AMPKα1的表達水平；應用熒光探針Fluo-3（綠色熒光）。
　　方法，激光共聚焦顯微鏡觀察海洛因、AICAR對海馬星形膠質細胞內線粒體中Ca2+的影響。結果：1)Western blot檢測顯示，大鼠海馬組織中有低分子量的Calpian-1表達，分子量約為45kDa,；與對照組相比，成癮組海馬

3、組織中Calpain-1的表達總量和低分子量片段表達都明顯減少（P<0.01），且海洛因處理后星形膠質細胞中Calpain-1的表達總量和低分子片段表達水平均低于對照組（P<0.01），海洛因組和AICAR組海馬星形膠質細胞AMPKα1 Thr172位點磷酸化的表達水平比對照組高，其 AMPKα1的表達水平也增高（P<0.01）；2)細胞免疫熒光結果顯示，在培養(yǎng)的星形膠質細胞中檢測到較強的GFAP紅色熒光，熒光主要集中在胞質中，呈絲狀分

4、布；3)海洛因預處理后海馬星形膠質細胞線粒體中 Ca2+濃度與對照組細胞比較明顯增高（P<0.05）； AICAR刺激海馬星形膠質細胞，與AICAR處理前2s比較,加入AICAR2s后海馬星形膠質細胞線粒體中Ca2+濃度顯著增加（P<0.05）。
　　結論:海洛因使AMPKα1 Thr172位點磷酸化從而激活AMPK，激活后的AMPK引起線粒體中Ca2+濃度增加；海洛因通過激活AMPK降低海馬星形膠質細胞中 Calpain-1的表