Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在胃癌中的表達及其意義.pdf

1、目的：研究Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中Notch1和NUMB基因在胃癌組織、正常組織和不同分化程度的胃癌細胞株中的表達情況及其與臨床病理特征的關(guān)系；在此基礎(chǔ)上探討通過RNA干擾技術(shù)沉默Notch1基因進而影響胃癌細胞的增殖和浸潤轉(zhuǎn)移能力的可能性；同時通過在胃癌細胞內(nèi)過表達NUMB基因，探索其對胃癌細胞功能和惡性生物學(xué)行為的影響，以期進一步明確在胃癌中NUMB基因調(diào)控Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的機制，為未來腫瘤的基因治療提供一定的實驗依據(jù)和理論基

2、礎(chǔ)。
　　 方法：(1)隨機選取上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟醫(yī)院普外科2009年1月～2009年10月接受胃癌根治術(shù)的病人，共40例。所有病例均經(jīng)病理證實，且術(shù)前未行放化療，病人均知情同意。采用實時熒光定量PCR(Real-time PCR)和Western印跡法(Western blot)分別檢測胃癌病人腫瘤組織和相應(yīng)正常組織內(nèi)Notch1和NUMB的表達，并分析兩者的表達情況與腫瘤浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移、分化程度、疾病分期等臨床病

3、理學(xué)特征的關(guān)系以及兩者表達的相關(guān)性。(2)采用實時熒光定量PCR和Western印跡法分別檢測不同分化程度的胃癌細胞和正常胃黏黏膜上皮細胞Notch1和NUMB mRNA及其蛋白的表達水平。(3)構(gòu)建RNA干擾真核表達載體靶向抑制低分化胃腺癌BGC-823細胞內(nèi)的Notch1表達，檢測RNA干擾對胃癌細胞體外的增殖、遷移和侵襲能力的變化以及對細胞凋亡的影響。(4)構(gòu)建NUMB真核表達載體并轉(zhuǎn)染低分化胃腺癌BGC-823細胞，檢測NUMB

4、基因過表達對胃癌細胞體外增殖、遷移和侵襲能力的變化以及對細胞凋亡的影響。
　　 結(jié)果：(1)Notch1 mRNA在胃癌中表達水平明顯升高，其平均表達水平是正常胃組織的1.67倍，并且兩組表達量的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。NUMB mRNA在胃癌中表達水平明顯降低，在胃癌中的平均表達水平僅是正常胃組織的0.597倍，并且兩組表達量的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Notch1 mRNA在胃癌中的表達與腫瘤的分化程度和淋

5、巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，NUMB mRNA在胃癌中的表達僅與腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05)。Notch1和NUMB在胃癌組織中的表達呈負相關(guān)關(guān)系(r=-0.459，P<0.05)。胃癌腫瘤組織中Notch1蛋白的相對含量分別為0.348±0.133，明顯高于正常組織中Notch1蛋白相對含量的0.208±0.140(P<0.05)，胃癌腫瘤組織中NUMB蛋白的相對含量分別為0.490±0.440，明顯低于正常組織中NUMB蛋白相對

6、含量的0.746±0.390(P<0.05)。(2)Notch1 mRNA和蛋白在胃癌細胞中的表達水平均高于正常胃黏膜上皮細胞，不同分化程度的胃癌細胞間Notch1 mRNA相對表達量均有顯著差異(P<0.05)。NUMB mRNA和蛋白在胃癌細胞中的表達水平均低于正常胃黏膜上皮細胞，但不同分化程度的胃癌細胞間NUMB mRNA相對表達量均無明顯差異(P>0.05)。(3)RNA干擾后低分化胃腺癌BGC-823細胞的Notch1 mRN

7、A和蛋白表達水平明顯下降(P<0.05)，與空白對照組(只加脂質(zhì)體)和陰性對照組(轉(zhuǎn)染不針對任何靶基因的shRNA)相比，細胞增殖能力顯著下降(P<0.05)，體外遷移和侵襲能力明顯降低(P<0.05)，細胞凋亡率明顯升高(P<0.05)。(4)NUMB基因過表達的低分化胃腺癌BGC-823細胞，與空白對照組(只加脂質(zhì)體)和空載質(zhì)粒組(轉(zhuǎn)染不含NUMB基因的質(zhì)粒)相比，細胞增殖能力顯著下降(P<0.05)，體外遷移和侵襲能力明顯降低(P

8、<0.05)，細胞凋亡率明顯升高(P<0.05)。與Notch1RNA干擾組相比，NUMB過表達組的細胞增殖能力下降更為明顯，體外侵襲能力下降更為明顯(P<0.05)。
　　 結(jié)論：(1)胃癌腫瘤組織中的Notch1 mRNA和蛋白水平顯著高于正常組織，且與腫瘤細胞的分化程度和淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，而NUMBmRNA和相應(yīng)蛋白在胃癌腫瘤組織中則呈現(xiàn)低表達，且與Notch1的表達呈負相關(guān)。(2)胃癌腫瘤細胞中Notch1 mRNA和蛋白的

9、表達水平高于正常胃黏膜上皮細胞，而NUMB mRNA和蛋白在胃癌細胞中則呈現(xiàn)低表達。在低分化胃腺癌BGC-823細胞中Notch1 mRNA的表達水平分別高于中分化和高分化的胃腺癌細胞。(3)Notch1基因表達量的下降可以顯著抑制低分化胃腺癌BGC-823細胞的增殖，降低細胞的遷移和侵襲能力，并能促進腫瘤細胞凋亡。(4)NUMB基因過表達可以顯著抑制低分化胃腺癌BGC-823細胞的增殖，降低細胞的遷移和侵襲能力，并能促進腫瘤細胞凋亡，