拉莫三嗪對癲癇大鼠學(xué)習記憶及Bax、Bcl-2表達的影響.pdf

1、背景：癲癇發(fā)作可導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷，而海馬是腦損傷最容易受累的部位。Bax和Bcl-2是腦損傷后細胞凋亡的誘導(dǎo)蛋白和凋亡抑制蛋白。流行病學(xué)調(diào)查及臨床研究均證實發(fā)育階段長期反復(fù)癲癇發(fā)作可損害學(xué)習、記憶等認知功能。目前癲癇發(fā)作的治療主要是藥物治療，目前普遍認為傳統(tǒng)抗癲癇藥物(AntiepilepticDrugs，AEDs)對認知功能的影響較大，而對新型AEDs對認知功能的影響了解較少。拉莫三嗪(lamotrigine，LTG)是一種新型AED

2、s，其對癲癇發(fā)作后腦損傷的保護作用機制以及對患者認知功能的影響等方面的研究近年來一直是學(xué)者們關(guān)注的熱點問題。
　　 目的：通過觀察LTG干預(yù)大鼠慢性癲癇模型發(fā)作情況和學(xué)習記憶的改變，檢測其海馬組織中Bax、Bcl-2蛋白表達情況，分析癇性發(fā)作過程中大鼠的行為和學(xué)習記憶是否與大鼠海馬組織中Bax、Bcl-2蛋白表達水平有關(guān)、LTG的保護作用是否與海馬中Bax、Bcl-2蛋白表達水平有關(guān)，大鼠的行為和學(xué)習記憶水平、海馬組織中Bax、

3、Bcl-2蛋白表達水平是否與LTG的劑量有關(guān)，為臨床應(yīng)用LTG及其劑量選擇提供理論依據(jù)。
　　 方法：選用6周健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠100只。隨機分為正常組、模型組、LTG低劑量組、LTG中劑量組、LTG高劑量組，每組20只。每天每只大鼠腹腔注射戊四氮(Pentetrazole，PT2)35 mg/kg制備癲癇模型，正常組給予同體積生理鹽水。觀察其行為學(xué)變化30min。行為學(xué)判斷按Racine分級法連續(xù)

4、出現(xiàn)3次Ⅲ級以上發(fā)作作為點燃標準。全部點燃后(約2周)，按LTG最大推薦劑量(600mg/d)的1/30、1/20、1/10分為低、中、高劑量組，即LTG低劑量組[20mg/(kg·d)]、中劑量組[30mg/(kg·d)]、高劑量組[60mg/(kg·d)]；正常組和模型組予以等體積生理鹽水。LTG與生理鹽水配成所需濃度，大鼠給藥容積1mL/100g，每天灌胃給藥一次，共2周。造模第31天予以Morris水迷宮實驗，連續(xù)5d，比較每組

5、大鼠在迷宮測試中每日各時間點，第5天進行記憶與判斷測驗。各組大鼠水迷宮實驗結(jié)束后，經(jīng)心臟灌注固定取腦。通過HE染色了解其海馬組織的病理學(xué)變化；采用免疫組織化學(xué)法觀察其Bax、Bcl-2蛋白表達變化。各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS17.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析，多樣本均數(shù)的兩兩比較采用單因素方差分析，以P<0.05作為顯著性檢驗標準。
　　 結(jié)果：1.正常對照組無癇性發(fā)作；模型組有癲癇發(fā)作，發(fā)作潛伏期最短(1.7

6、0±0.79)min，但持續(xù)時間最長(6.38±2.20)min；低劑量組、中劑量組、高劑量組均有癇性發(fā)作，但發(fā)作級別降低，其中高劑量組潛伏期最長(6.81±1.86)min，持續(xù)時間最短(2.16±1.32)min；與模型組比較，低劑量組、中劑量組、高劑量組癲癇發(fā)作的潛伏期延長，發(fā)作級別降低；模型組與正常組癲癇發(fā)作潛伏期和持續(xù)時間比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；低劑量組、中劑量組、高劑量組與模型組癲癇發(fā)作潛伏期和持續(xù)時間比較

7、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；
　　 2.Morris水迷宮實驗，大鼠定位航行實驗結(jié)果顯示：正常組、模型組、LTG低、中、高劑量組的第一天逃避潛伏期分別為(25.15±1.39)s、(60.08±1.17)s、(54.50±0.93)s、(37.93±1.23)s、(36.38±0.83)s。各組第二天的逃避潛伏期分別為(20.58±0.86)s、(61.22±1.64)s、(58.59±0.91)s、(30.70±0.95

8、)s、(30.63±0.95)s。各組第三天的逃避潛伏期分別為(15.45±0.61)s、(59.59±0.63)s、(57.31±1.06)s、(30.47±0.57)s、(25.16±1.71)s。各組第四天的逃避潛伏期分別為(12.64±0.86)s、(55.62±0.40)s、(56.57±1.61)s、(27.69±0.82)s、(20.59±0.95)s。與正常組相比，模型組大鼠的逃避潛伏期明顯增加；LTG低、中、高劑量組與

9、模型組相比，逃避潛伏期明顯縮短?？臻g探索實驗結(jié)果顯示：模型組記憶探索正確時間為(26.01±2.21)s，與正常組(48.77±3.40)s比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；大鼠120 s內(nèi)在原放有平臺的象限內(nèi)停留的時間，LTG低、中、高劑量組記憶探索正確時間分別為(27.85±1.05)s、(37.96±0.97)s、(39.82±1.34)s，與模型組相比明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.海馬組織病

10、理變化，模型組、LTG治療組(低劑量組、中劑量組、高劑量組)海馬CA1區(qū)小錐體細胞、CA3區(qū)大錐體細胞及DG區(qū)顆粒細胞排列較疏松雜亂，可見海馬區(qū)細胞腫脹，邊緣欠清晰，胞核、胞質(zhì)深染，染色質(zhì)邊集凝集成塊狀，細胞空泡樣變性，胞膜內(nèi)陷，部分可見凋亡小體形成；且模型組較LTG各組嚴重，可見點片狀壞死的細胞；正常組海馬CA1區(qū)小錐體細胞、CA3區(qū)大錐體細胞及DG區(qū)顆粒細胞排列較整齊，可見海馬區(qū)細胞完整，邊緣清晰，胞核呈圓形、橢圓形，染色質(zhì)核內(nèi)分布

11、均勻，核仁清晰，僅少許神經(jīng)細胞空泡樣變性，染色質(zhì)邊集，體積增大，細胞腫脹呈圓形；
　　 4.大鼠海馬神經(jīng)元免疫組化染色Bax、Bcl-2比較：正常對照組中Bax、Bcl-2蛋白染色陽性細胞低表達，其Bax和Bcl-2蛋白陽性表達分別為0.16±0.39、0.26±0.03；模型組Bax和Bcl-2蛋白陽性表達分別為0.35±0.05、0.27±0.03，和正常組比較Bax陽性細胞數(shù)增加，而Bcl-2陽性細胞數(shù)也增加；LTG低、中

12、、高劑量組Bax蛋白陽性表達分別為0.29±0.45、0.24±0.04、0.20±0.05，LTG低、中、高劑量組Bcl-2蛋白陽性表達分別為0.33±0.28、0.36±0.04、0.38±0.02，與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；LTG低、中、高劑量組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1.在PTZ致癇性發(fā)作過程中，大鼠的行為和學(xué)習記憶能力可能與其海馬區(qū)Bcl-2和Bax表達的變化有關(guān)。