HSP22在心肌缺血再灌注損傷中的保護作用.pdf

1、目的：熱休克蛋白(Heat shock protein，HSP)是生物體在對各種物理、化學和微生物應激時啟動的一組因熱休克基因表達而產生的特殊蛋白質，它們能快速調整應激過程中細胞的存活機能，保護細胞抵御損傷并有助于細胞恢復正常的結構和機能。心肌缺血再灌注損傷(Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury，MIRI)是指缺血期處于可逆損傷的心肌細胞恢復血液供應后產生更為嚴重的損傷，其保護作用的機制均與誘導產

2、生熱休克蛋白有關。本課題擬用已經構建的HSP22過表達的小鼠模型，應用該模型研究HSP22在心肌缺血再灌注損傷中的作用，闡明HSP22對心肌缺血再灌注損傷的保護作用機制，為研制減少心肌梗塞、預防心肌疾病的藥物打下基礎。
　　 方法：對經PCR、測序和Southern Blot分析證實的轉基因首建鼠，穩(wěn)定傳代后，取F4代小鼠的鼠尾提取DNA，經PCR，測序鑒定出HSP22轉基因小鼠。采用體重和年齡均無顯著性差異的F4代野生型C57

3、BL小鼠(對照組，n=5)和pCAGGS-HA-HSP22轉基因C57BL小鼠(實驗組，n=5)制作心肌缺血再灌注損傷的模型，取其心臟標本，通過免疫組化測定兩組小鼠心肌HSP22蛋白的含量，應用直接化學法檢測缺血再灌注后心肌組織中丙二醛(MDA)和的蛋白質羰基濃度。對所得結果進行統(tǒng)計學分析，比較兩組心肌組織HSP22蛋白的含量，丙二醛的濃度，蛋白質羰基化程度的差異是否有統(tǒng)計學意義，分析HSP22蛋白對缺血再灌注后脂質氧化損傷及蛋白質氧化

4、損傷是否有保護作用。
　　 結果：⑴對攜帶人類野生型HSP22基因的轉基因小鼠傳代后的F3，F(xiàn)4代小鼠進行鼠尾DNA測序，成功鑒定出HSP22過表達的轉基因小鼠。⑵對照組和實驗組經心肌缺血再灌注損傷的模型后的心肌組織中均有HSP22的蛋白表達，兩組蛋白主要在胞漿表達。實驗組小鼠的PI值為10.21±4.75，較對照組小鼠的PI值4.19±1.12明顯升高，P<0.05，差異顯著。⑶兩組小鼠MDA測定結果：對照組MDA含量為193

5、.89±27.61明顯高于實驗組82.96±29.14，P<0.05，差異顯著。⑷兩組小鼠蛋白質羰基測定結果：對照組蛋白質羰基含量為21.56±9.12明顯高于實驗組6.56±1.99，P<0.05，差異顯著。
　　 結論：①攜帶人類野生型HSP22基因的轉基因小鼠能在F3，F(xiàn)4代中穩(wěn)定傳代。②經心肌缺血再灌注損傷模型后的小鼠心肌組織中HSP22的表達量實驗組明顯高于對照組。③HSP22在心肌缺血再灌注損傷中通過降低心肌脂質過氧