茶樹脫水素基因的克隆與非生物脅迫下蛋白的Western-blot分析.pdf

1、茶樹是一種多年生的木本植物，在生長發(fā)育的過程中受到多種逆境因素的影響。為了提高茶樹的抗逆性，培育優(yōu)質高產的茶樹品種，一般都采用優(yōu)化栽培措施，改善栽培條件等，但是品種的抗逆遺傳特性才是起決定作用的因素。研究茶樹抗逆機理，發(fā)掘抗性相關基因及蛋白，對開展茶樹分子育種有著積極意義。本研究采用基因克?。≧ACE）和蛋白質免疫印跡（Western-blot）技術，研究了不同脅迫下茶樹葉片中脫水素基因及蛋白家族的表達模式，得出以下結論：
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2、、從茶樹中克隆得到 CsDHN3的cDNA全長序列，序列分析表明其全長為869 bp，開放閱讀框（ORF）為627 bp，編碼208個氨基酸，為21.7 kD小分子量的中性多肽，其預測的等電點為6.95。序列分析表明為親水性蛋白，無信號肽，屬于非分泌蛋白，進化樹分析發(fā)現(xiàn)茶樹 CsDHN3與油茶的親緣關系最近。運用qRT-PCR技術分析了茶樹不同組織（頂芽、成熟葉片、花、根和種子）中 CsDHN3的表達水平，結果表明，CsDHN3具有組織

3、特異性且主要分布在茶樹種子中。隨著脫水處理時間的增加而增加，到30 h的時候表達量達到最大值為對照的2.13倍，此時種子中的含水量已經降到20.04％，之后CsDHN3的表達量出現(xiàn)明顯的下調。
　　2、茶樹葉片總蛋白提取通過TCA-丙酮沉淀法、試劑盒法和酚-甲醇/醋酸銨沉淀法比較發(fā)現(xiàn)，其中酚-甲醇/醋酸銨沉淀法用時短，蛋白濃度高、SDS-PAGE電泳條帶清晰，背景干凈，滿足Western-blot技術要求。
　　3、在非生物

4、脅迫（低溫、干旱、ABA、BR）處理下，對10種不同分子量的茶樹脫水素蛋白的表達模式進行了研究，發(fā)現(xiàn)其中95、65和48 kD3種蛋白表達量較為穩(wěn)定。58 kD僅在干旱處理25 d達到最大值，復水后又趨于對照水平；37 kD僅在AB A處理12 h時達到最大值，之后又逐漸降低。34 kD在低溫和干旱處理下均上升；在ABA處理12 h時達到最大值，之后又逐漸降低。28 kD在低溫處理下表達量逐漸上升；在BR處理下逐漸的降低。26 kD僅在